WB、IF/ICC、IP、ELISA用抗PKM2モノクローナル抗体 - P14618

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：PKM2の機能と局在

• PKM2は、ホスホエノールピルビン酸（PEP）からADPへのリン酸基の転移を触媒し、ATPを生成することにより、解糖系の最終律速段階を触媒します。この酵素の活性は、高活性の四量体とほぼ不活性な二量体の間の動的平衡によって調節され、グルコース炭素の運命がエネルギー産生へ向かうか、生合成へ向かうかを決定します。 関連文献： PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• PKM遺伝子は、選択的スプライシングを介して2つの主要なアイソフォームを生成します：成人型M1アイソフォーム（PKM1）と胚性M2アイソフォーム（PKM2）です。PKM2は本来低いピルビン酸キナーゼ活性を持ち、D-フルクトース-1,6-ビスリン酸（FBP）によるアロステリック活性化を必要としますが、PKM1は構成的に活性です。 関連文献： PMID:18337823 PMID:20847263
• 細胞質での代謝的役割に加え、PKM2は核タンパク質キナーゼとして機能します。EGF受容体活性化などの刺激により、PKM2は核に移行し、Tyr-705のSTAT3やThr-11のヒストンH3などの標的をリン酸化し、細胞増殖、血管新生（例：VEGFA）、および腫瘍形成に関与する遺伝子の転写を促進します。 関連文献： PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• PKM2は、胚性幹細胞、胚性癌細胞、がん細胞を含む高度に増殖性の細胞に主に発現しており、確立された腫瘍バイオマーカーとなっています。成人型アイソフォームであるPKM1は正常な成人組織に発現し、一般的に腫瘍には存在しません。 関連文献： PMID:18337823
• PKM2は細胞質と核の両方に局在します。その核移行は様々なシグナル伝達経路によって誘導され、非代謝性の発がん機能にとって重要です。
• アセチル化、リン酸化、ヒドロキシル化、メチル化などの翻訳後修飾は、PKM2の代謝活性、タンパク質安定性、および核移行を厳密に調節し、細胞の代謝状態をシグナルネットワークにリンクさせています。

実験のガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原は、ヒトPKM2（NP_002645.3）のアミノ酸380〜480にまたがる合成ペプチドであり、これはPKM2をM1アイソフォームと区別する独自のC末端領域内に位置しています。この設計は、PKM1よりもPKM2に対する高い特異性を示唆しています。
• ウェスタンブロットにおいて、PKM2の予測分子量は約58 kDaです。適切なポジティブコントロール（例：ヒトがん細胞株）を使用して抗体の性能を検証し、一次抗体の希釈倍率と露光時間を最適化することを検討してください。
• 免疫蛍光法/免疫細胞化学（IF/ICC）では、PKM2は細胞質と核の両方に存在する可能性があるため、PKM2の局在を保持するために、様々な固定および透過処理プロトコルをテストしてください。
• 免疫沈降（IP）では、タンパク質複合体を維持するためにネイティブな溶解条件を使用し、標的の捕獲効率を確認してください。
• ELISAを実行する際は、組換えPKM2タンパク質で標準曲線を作成し、関連するサンプルマトリックスにおける感度と特異性を検証してください。
• マウスおよびラットのPKM2との交差反応性が示されています。種特異的なコントロールを使用して、特定の実験系での標的認識を確認してください。

CamelBio：ワンストップ調達パートナー

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