抗プロテイナーゼKウサギポリクローナル抗体 - P06873

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：プロテイナーゼKの機能と局在

• プロテイナーゼKは、もともとParengyodontium album（旧称Tritirachium album）という真菌から単離された広域スペクトルセリンプロテアーゼで、PROK遺伝子によってコードされています。
• これはサブチリシン様セリンプロテアーゼファミリーに属し、ペプチド結合の加水分解を担う古典的な触媒三残基（Asp-His-Ser）を特徴とします。
• 本酵素は芳香族および疎水性アミノ酸残基に隣接するペプチド結合を優先的に切断するため、ケラチンやその他の分解が困難なタンパク質を効果的に分解できます。
• プロテイナーゼKは、シグナルペプチドとプロペプチドを有するプレプロタンパク質として合成され、これらがタンパク質分解によって除去されることで、約28.9 kDa（成熟型）の活性成熟酵素となります。完全長プレプロタンパク質の分子量は約40.3 kDaです。
• カルシウム結合により安定性と活性が向上し、自己分解および熱変性から保護されます。さらに、2つのジスルフィド結合が三次構造を安定化します。
• 立体構造は解明されており（例：PDBエントリー）、深い基質結合溝を備えた典型的なサブチリシンフォールドが明らかになっています。
• 堅牢な広域スペクトルのタンパク質分解活性を有するため、プロテイナーゼKは核酸精製時のタンパク質除去をはじめ、さまざまな産業用途で分子生物学に広く利用されています。

実験ガイダンスおよび技術上のヒント

• 免疫原は組換えプロテイナーゼKタンパク質であり、天然エピトープと変性エピトープの両方を提示する可能性があります。アッセイで天然条件と変性条件のどちらを選択するかを検討する際には、この点を考慮してください。
• WBでは、標的の分解を防ぐため、適切な溶解バッファーとプロテアーゼ阻害剤を含む適切なサンプル調製を行ってください。適切な抗ウサギ二次抗体を使用し、バックグラウンドを低減するためにブロッキング条件を最適化してください。
• ELISAでは、既知の陽性対照および陰性対照を用いてアッセイを検証してください。天然抗原とコーティング抗原に対する抗体の反応性は異なる場合があるため、抗原固定化方法を検討してください。

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