WB、ELISA用抗RAG1ウサギポリクローナル抗体 - P15918

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：RAG1の機能と局在

• RAG1（組換え活性化タンパク質1、RAG-1およびRNF74としても知られる）は、発生中のリンパ球において多様な免疫グロブリン遺伝子およびT細胞受容体遺伝子を構築するV(D)J組換えに不可欠な、RAG複合体の触媒サブユニットです。
• RAG1は保存された組換えシグナル配列（RSS）に直接結合し、2段階の機構によって部位特異的なDNA二本鎖切断を触媒します。まずヘプタマー上流をニッキングし、続いてトランスエステル化によってヘアピンを形成し、平滑なシグナル末端とヘアピン状のコーディング末端を生成します。すべての触媒活性にはRAG2が必要です。
• エンドヌクレアーゼ活性に加えて、RAG1はE3ユビキチン・タンパク質リガーゼとして機能し、未知の部位でヒストンH3をモノユビキチン化します。この修飾はV(D)J組換えの結合段階に必要です。さらに、Lys-4におけるH3のトリメチル化（H3K4me3）は、両方の切断段階を促進します。
• RAG1は核に局在し、クロマチンと相互作用して組換え事象を媒介します。
• その発現は成熟過程にあるリンパ系細胞に限定されており、リンパ球の発生における役割と一致しています。
• RAG1はプレB細胞におけるアレル排除にも関与します。ATM依存的に一方の免疫グロブリンアレルをセントロメア近傍のヘテロクロマチンへ再配置することで、2番目のアレルの組換えを防ぎ、クローン性を確保します。
• このタンパク質は選択的スプライシングを受けます。また、その多機能性は、DNA結合、エンドヌクレアーゼ、加水分解酵素、金属結合（ジンクフィンガー）、転移酵素、UBL結合、重症複合免疫不全症（SCID）に関連する疾患バリアントなどのキーワードによって示されています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はヒトRAG1のN末端領域（アミノ酸1～270）にまたがっており、DNA結合ドメインを含みます。この領域により、選択的スプライシングに起因する複数のアイソフォームが検出される可能性があります。
• ウエスタンブロッティングでは、予測分子量は約119 kDaです。高分子量タンパク質には、6～8% SDS-PAGEゲルの使用と、転写時間の延長を検討してください。
• ELISAプロトコルでは、組換えRAG1タンパク質またはペプチドによるコーティングを利用できます。特異性を確保するため、使用するサンプルマトリックスでアッセイ条件を検証してください。
• マウスとの交差反応性が予想されます。マウスのリンパ系組織または細胞株で使用する場合は、性能を検証してください。
• ヒトまたはマウスのリンパ系細胞株（例：Jurkat、Raji、EL4）由来のタンパク質抽出物は、適切な陽性対照となる可能性があります。非リンパ系細胞株は陰性対照として使用できます。

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