WB、IF/ICC、ELISA用抗RBポリクローナル抗体 - P06400

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：RBの機能と局在

• RB（網膜芽細胞腫関連タンパク質）は、腫瘍抑制因子であり、G1/S細胞周期移行の主要な調節因子です。低リン酸化型はE2F転写因子に結合し、S期への移行に必要な遺伝子の転写を抑制します。サイクリン/CDK依存的なリン酸化によりE2Fが解放され、細胞周期の進行が引き起こされます（PubMed:10499802）。また、RBはCDK3/サイクリンCによるリン酸化を介してG0-G1移行を促進します（PubMed:15084261）。

  関連文献： PMID:10499802 PMID:15084261

• ヒストンメチル化を安定化し、ヒストンメチルトランスフェラーゼSUV39H1、KMT5B、KMT5Cをリクルートすることで、ヘテロクロマチン形成に直接関与します。ヒストンH4リジン20のトリメチル化を制御し、エピジェネティックな転写抑制をもたらします。

• ヒストン脱アセチル化酵素（HDAC）複合体をc-FOSプロモーターへリクルートすることにより、SMARCA4/BRG1による転写抑制を媒介します。静止状態のニューロンでは、リン酸化RB1-HDAC1抑制複合体がc-FOS転写を阻害します。カルシウム流入により、カルシニューリンを介してRB1が脱リン酸化され、抑制が解除されます。

• 細胞内局在は核および細胞質です。

• 網膜および包皮ケラチノサイトで発現します（タンパク質レベル）（PubMed:20940255）。

  関連文献： PMID:20940255

• アセチル化、メチル化、ならびにその活性と相互作用を調節する広範なリン酸化など、主要な翻訳後修飾を受けます。

• ウイルス感染時には、SV40ラージT抗原、HPV E7タンパク質、またはアデノウイルスE1Aタンパク質がRB1に結合し、RB1-E2F1複合体を破壊して、その腫瘍抑制機能を無効化します。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はC末端領域（aa 701-928）に相当します。この領域は高度に保存されており、全長RB（約106 kDa）に対する反応性を生じる可能性が高いです。
• ウェスタンブロットでは、106 kDaのバンドを明瞭に分離できる中間域のタンパク質ラダーを使用してください。内在性RBを最適に検出するには、核抽出物が推奨されます。関連するヒト細胞株（RBの状態が既知の細胞株など）で抗体をバリデーションし、バックグラウンドが観察された場合は、ブロッキングペプチド対照の使用を検討してください。
• IF/ICCでは、固定および透過化条件を最適化してください。メタノール固定により、核RBエピトープがより良好に保持される場合があります。ELISAでは、組換え免疫原を陽性対照として使用できます。
• ウサギで作製されたポリクローナル抗体であるため、ロット間で一貫性が異なる場合があります。適切な対照を含め、新しいロットごとにバリデーションを行ってください。

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