ウエスタンブロット、ELISA用 抗RNF4 ウサギポリクローナル抗体 - P78317

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景：RNF4の機能と局在

• RNF4（SLX5, SNURF）は、ポリSUMO化鎖に特異的に結合し、ポリユビキチン化（Lys-6、Lys-11、Lys-48、Lys-63結合）を媒介して基質をプロテアソーム分解へと導くE3ユビキチン-タンパク質リガーゼである。
  関連参考文献： PMID:18408734, PMID:19307308, PMID:35013556

• PML、転写活性化因子PEA3、SUMO化PARP1など重要な細胞タンパク質の分解を調節し、転写制御とDNA損傷応答の両方において役割を果たす。
  関連参考文献： PMID:18408734, PMID:19307308, PMID:20943951, PMID:35013556

• RNF4は、キネトコア複合体CENPH-CENPI-CENPK中のポリSUMO化CENPIを分解の標的とすることで、有糸分裂における染色体整列と紡錘体形成に不可欠である。
  関連参考文献： PMID:20212317

• EPAS1/HIF-2αおよびPARP1の分解を媒介することで、それぞれ低酸素および熱ショックに対する細胞応答を調節する。
  関連参考文献： PMID:19779455, PMID:20026589

• あるいは、RNF4はDNA/ヌクレオソームに結合し、基礎的およびステロイド受容体媒介性転写を増強することができ、直接的な転写調節機能を示唆している。
  関連参考文献： PMID:12885770

• 本タンパク質は、RINGフィンガードメインと複数の亜鉛フィンガーモチーフを含み、そのDNA結合およびE3リガーゼ活性と一致する（キーワード：DNA結合、金属結合、亜鉛、亜鉛フィンガー）。

• 細胞内局在としては、RNF4は細胞質、核、およびPML核小体に局在し、核および細胞質プロセスの両方への関与を反映している。

• 多くの組織で低発現しているが、精巣では高発現しており、生殖細胞発達における特化した役割が示唆される。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトRNF4のアミノ酸1-190からなり、複数の亜鉛フィンガーモチーフとRINGドメインを含むN末端領域をカバーしている。この設計により、全長およびN末端フラグメントの両方を認識する可能性のある抗体が得られる。
• ウエスタンブロッティングでは、未修飾RNF4に対して約21 kDaのバンドが期待される。広範な翻訳後修飾（SUMO化、ユビキチン化）により、追加のバンドが観察される可能性がある。精巣組織など、内因性RNF4が高発現するサンプルで検証すること。
• ELISA応用では、特異性を証明するために組換え免疫原またはSUMO化基質をコーティングすることを検討すること。間接ELISAの条件は経験的に決定する必要がある。
• マウスおよびラットとの交差反応性が報告されている。免疫原領域の配列相同性を確認すること。N末端配列はこれらの種間で高度に保存されている。

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