WB、IHC-P、ELISA用抗RNF8ウサギモノクローナル抗体 - O76064

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：RNF8の機能と局在

• E3ユビキチンタンパク質リガーゼRNF8（RINGフィンガータンパク質8）は、DNA損傷応答の主要なメディエーターです。ATMによってリン酸化されたMDC1により二本鎖切断部位へリクルートされ、ヒストンH2AおよびH2AXの「Lys-63」結合型ユビキチン化を触媒します。これにより、BRCA1やTP53BP1などのDNA修復タンパク質が、電離放射線によって誘導されるフォーカスへ集合することを促進します。
  関連文献： PMID:18001824、PMID:18006705
• RNF8はH2A／H2AXのユビキチン化を介して、ファンコニ貧血複合体やFAAP20などの因子をDNA鎖間架橋へリクルートします。また、DSB近傍におけるATM依存的な転写サイレンシングを調整し、転写と修復の衝突を防ぎます。
• 異なるE2酵素との相互作用を通じて、RNF8は「Lys-48」結合型ポリユビキチン鎖（例：UBE2L6との組み合わせ）を形成し、CHEK2、JMJD2A／KDM4A、KU80／XRCC5などの基質をプロテアソーム分解へ導くことができます。これにより、修復経路の選択とクロマチンへのアクセス性が調節されます。
  関連文献： PMID:11322894、PMID:14981089、PMID:17724460
• RNF8は高次クロマチンの脱凝縮に寄与し、H4K16のアセチル化を誘導するヒストンH2Bのユビキチン化を促進することで、ATMキナーゼを間接的に活性化します。
• RNF8は精子形成に必須であり、精子成熟時のヒストン置換を促進します。また、DSB修復における役割を通じて、免疫系のクラススイッチ組換えにも関与します。
  関連文献： PMID:22865450
• このタンパク質は主に核に局在し、細胞質、ミッドボディ、テロメアにも存在します。これは、細胞周期の進行とゲノム安定性における多面的な役割と一致します。
• 組織発現は普遍的で、胎児期には脳、胸腺、肝臓で、成人では脳および精巣で最も高い発現レベルを示します。このことは、DNA修復およびクロマチン制御におけるRNF8の広範な重要性を示しています。
• RNF8タンパク質はRINGフィンガードメインを含み、リン酸化タンパク質に分類されます。分子量は約55.5 kDaです（UniProt：55518 Da）。キーワードには、宿主-ウイルス相互作用、金属結合（亜鉛）、ユビキチン結合にも関与することが示されています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はヒトRNF8のN末端アミノ酸1～260に相当します。そのため、本抗体はリン酸化依存的相互作用に関与するFHAドメインを含むN末端領域内のエピトープを認識する可能性があります。
• ウェスタンブロットでは、ヒト、マウス、ラットの細胞溶解液中でRNF8は見かけの分子量約56 kDaに移動すると予想されます。特異性を確認するため、適切な陽性および陰性対照を使用してください。
• IHC-Pでは、抗原賦活化処理（例：クエン酸緩衝液、pH 6.0）の最適化を検討し、精巣や脳など、RNF8の発現が既知の組織で検証してください。
• ELISAでは、エンドユーザーが組換え抗原または関連するサンプルタイプを用いて、最適なコーティング濃度および検出条件を決定してください。
• マウスおよびラットRNF8との交差反応性が報告されています。通常使用する前に、対象となるモデル系で性能を確認してください。

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