ウエスタンブロット、IHC-P、ELISA用 抗RSK2 / RPS6KA3 ウサギモノクローナル抗体 - P51812

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景: RSK2の機能と局在

• RSK2 (リボソームタンパク質S6キナーゼ アルファ-3) は、RPS6KA3、p90RSK3、MAPKAPK1B、ISPK-1とも呼ばれ、ヒトX染色体上のRPS6KA3遺伝子によってコードされるセリン/スレオニンタンパク質キナーゼです。AGCキナーゼファミリーに属し、リンカー領域で接続された2つのキナーゼドメインを含みます。
• ERK/MAPKシグナルカスケードの下流で作用し、RSK2はEGF刺激により転写因子CREB1とヒストンH3のSer-10を直接リン酸化し、即時早期遺伝子の発現を引き起こします (PubMed:10436156, 9770464)。
  関連参考文献: PMID:10436156 PMID:9770464
• RSK2は、プロアポトーシス因子BADとDAPK1をリン酸化して不活性化することで、それらのアポトーシス機能を抑制し、細胞生存を促進します (PubMed:16213824)。
  関連参考文献: PMID:16213824
• リボソームタンパク質S6 (RPS6) と翻訳開始因子EIF4Bのリン酸化を通じて、RSK2はインスリンや増殖因子への応答におけるキャップ依存性翻訳を増強します (PubMed:17360704, 18508509, 18813292)。
  関連参考文献: PMID:17360704 PMID:18508509 PMID:18813292
• RSK2は、mTORC1の主要な調節因子であるTSC2とRPTORをリン酸化することで、栄養と増殖シグナルを統合し、PI3K/AKT経路とは独立してmTORシグナル伝達を調節します (PubMed:18722121)。
  関連参考文献: PMID:18722121
• 核と細胞質の両方に局在し、RSK2は多くの組織で発現しており、骨格筋で最も高いレベルが見られます。
• RPS6KA3の変異は、精神運動遅滞と骨格異常を特徴とするX連鎖性知的障害であるコフィン・ローリー症候群 (CLS) と関連しています。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトRSK2のアミノ酸600-700に対応する合成ペプチドであり、この領域はヒト、マウス、ラット間で保存されているため、観察された交差反応性を支持します。ウエスタンブロットでは、約84 kDaのバンドが期待されます。還元サンプルを使用し、20-30 µgの細胞溶解物をロードすることを検討してください。適切な陽性対照 (例: HeLa、A431、またはNIH/3T3細胞) と陰性対照 (例: RSK2ノックアウト溶解物またはsiRNA処理サンプル) を使用してバンド特異性を検証してください。
• 免疫組織化学 (IHC-P) では、クエン酸バッファー (pH 6.0) を用いた加熱抗原賦活化が推奨されます。一次抗体は1:50-1:200希釈から滴定を開始し、ポリマーベースのHRPシステムで検出を最適化してください。常にアイソタイプコントロールとRSK2を発現することが知られている組織切片を含めてください。
• ELISAアプリケーションでは、組換えRSK2タンパク質またはペプチドでコーティングし、標準的な間接ELISAプロトコルを使用することを検討してください。抗体の最適な作業濃度は、チェッカーボード滴定によって経験的に決定する必要があります。

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