WB、IF/ICC、ELISA用抗SARS-CoV-2 3CLproポリクローナル抗体 - P0DTC2

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：SARS-CoV-2 3CLproの機能と局在

• スパイク糖タンパク質(S)は、SARS-CoV-2の宿主細胞への侵入を媒介するクラスIウイルス融合タンパク質です。前駆体として合成された後、タンパク質分解によって切断され、S1サブユニットとS2サブユニットになります。
• S1サブユニットは受容体結合ドメイン(RBD)を含み、ヒトACE2受容体(アンジオテンシン変換酵素2)と結合して、ウイルスの宿主細胞への付着を促進します。 関連参考文献: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• 代替侵入経路はニューロピリン-1(NRP1)、NRP2、インテグリン、またはASGR1を利用し、特にACE2発現量が低い嗅覚上皮細胞における組織指向性に寄与する可能性があります。 関連参考文献: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• S2サブユニットはヒンジ依存性の立体配座再構成によって膜融合を媒介し、プレ融合状態からポスト融合ヘアピン状態に遷移します。この過程では、TMPRSS2やカテプシンLなどの宿主プロテアーゼによるS2'部位での切断が必要です。 関連参考文献: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Sタンパク質のストークドメインには3つのヒンジが存在し、受容体結合ヘッドに優れた配向自由度を付与しており、免疫回避に寄与する可能性があります。 関連参考文献: PMID:32817270
• 亜細胞局在はビリオン膜、宿主の小胞体-ゴルジ中間区画(ERGIC)膜、および宿主細胞膜に存在し、ウイルスの組み立て、放出、侵入における機能と一致しています。
• 本タンパク質は高度に糖化され、保存されたジスルフィド結合、コイルドコイル領域、膜貫通ドメインを含みます。また、超抗原特性を示し、免疫回避に寄与します。
• 分子量は約141 kDaであり、中和抗体、診断アッセイ、ワクチン開発における主要な標的です。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原が組換え3CLpro断片(アミノ酸1-306)であることから、特異性を確認するため、SARS-CoV-2感染細胞の溶解物や精製組換え3CLproなどの適切な陽性対照を使用してください。
• ウエスタンブロッティングでは、ブロッキングと抗体希釈条件の最適化を検討してください。全長3CLproの場合、約34 kDaのバンドが予想されますが、供給元はスパイクタンパク質に対応すると思われる141 kDaのバンドを報告しています。検出されたバンドは、適切な分子量マーカーと対照抗原で確認してください。
• 免疫蛍光/ICC実験では、細胞内プロテアーゼ検出のために透過処理工程を含め、細胞小器官マーカーで対比染色して亜細胞局在を評価してください。
• ELISAでは、ポリクローナル抗体の性質から、サンドイッチ法において捕捉抗体および検出抗体の両方として使用できます。特異性とシグナル対ノイズ比を向上させるため、異なるエピトープに対するモノクローナル抗体と組み合わせて使用してください。
• 他のコロナウイルスの3CLproとの潜在的な交差反応性に留意してください。配列アライメントや競合阻害アッセイが特異性の確認に役立つ場合があります。
• 性能はサンプルの種類や固定方法によって異なる場合があるため、常にご自身の実験系で抗体の性能を検証してください。

CamelBioについて：ワンストップ調達ブリッジ

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