ウエスタンブロット、ELISA用 抗WIPI1 ウサギポリクローナル抗体 - Q5MNZ9

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：WIPI1の機能と局在

• タンパク質の同一性とファミリー: WIPI1 (WDリピートドメインホスホイノシタイド相互作用タンパク質1) は、Atg18タンパク質ホモログまたはWIPI 49 kDaとも呼ばれ、ホスホイノシタイドと相互作用するWD40リピートタンパク質のWIPIファミリーに属します。これらのリピートは、その脂質結合およびオートファジー機能に必須です。
• 中核的オートファジー機能: WIPI1はオートファジー機構の重要な構成要素であり、細胞質内のカーゴをリソソームへ分解のために輸送するオートファゴソームの形成を担います。ホスファチジルイノシトール3-リン酸 (PtdIns3P) に結合し、小胞体にリクルートされてファゴフォア集合体の核形成を行います (PubMed:15602573, PubMed:20114074, PubMed:20484055)。 関連参考文献:
  • PMID:15602573
  • PMID:20114074
  • PMID:20484055
• 経路内での位置: ULK1およびPI3キナーゼの下流で作用し、WIPI1は小胞体膜上で生成されたPtdIns3Pを感知します。その後、WIPI2がATG12-ATG5-ATG16L1複合体をリクルートするのを助け、この複合体が直接、新生オートファゴソーム膜の伸長を駆動します。この機能は、飢餓誘導性およびカルシウム誘導性オートファジー、ならびにマイトファジーにおいて重要です (PubMed:28561066)。 関連参考文献:
  • PMID:28561066
• 脂質輸送と複合体形成: WDR45/WIPI4と共に、WIPI1はATG2タンパク質 (ATG2AまたはATG2B) のPI3P豊富な膜への結合を増強し、それによってオートファゴソーム拡大のための脂質輸送を促進します (PubMed:31271352)。 関連参考文献:
  • PMID:31271352
• ゼノファジーと抗菌防御: WIPI1は、Staphylococcus aureusなどの病原体の選択的オートファジーに参加し、細菌をWIPI1陽性のオートファゴソーム様小胞に取り込み、リソソームによる破壊へと導きます (PubMed:22829830)。 関連参考文献:
  • PMID:22829830
• 非オートファジー的役割: 典型的なオートファジーを超えて、WIPI1はメラノソームの成熟およびメラニン生成酵素の転写を調節します。このプロセスは飢餓誘導性経路から独立しています (PubMed:21317285)。また、マンノース-6-リン酸受容体の輸送にも関与している可能性があります (PubMed:15020712)。 関連参考文献:
  • PMID:21317285
  • PMID:15020712
• 組織分布と細胞内局在: WIPI1は遍在的に発現しており、骨格筋、心臓、精巣、膵臓、胎盤で最も高い発現レベルを示し、多くの腫瘍細胞株で発現が上昇しています。トランスゴルジ網、エンドソーム、クラスリン被覆小胞、プレオートファゴソーム構造に局在し、細胞骨格とも関連しています。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原設計: 免疫原は、ヒトWIPI1のアミノ酸187-446をカバーしており、この領域には複数のWD40リピートが含まれています。この中心部分は種を超えて保存されており、マウスおよびラットとの交差反応性が観察されることと一致しています。
• ウエスタンブロッティング (WB): WIPI1は筋組織、心臓、精巣で高発現しているため、これらの組織由来のライセートは適切な陽性対照となる可能性が高いです。予測される分子量は約49 kDaですが、選択的スプライシングまたは翻訳後修飾による追加のバンドが現れることがあります。ブロッキングステップを含め、siRNAまたはノックアウト対照を用いて特異性を検証することをお勧めします。
• ELISAへの適用: この抗体は間接ELISA法に使用できます。サンドイッチELISAの開発には、非重複エピトープに特異的なモノクローナル捕捉抗体とのペアリングを検討してください。組換えWIPI1タンパク質 (免疫原など) または高発現細胞からの細胞ライセートを用いて検証してください。
• 交差反応性と種間の一貫性: 報告されているヒト、マウス、ラットとの交差反応性は、認識されるエピトープが保存されていることを示唆しています。それでも、これら3種すべてのライセートを用いた予備的なウエスタンブロットを行い、反応性とバンドパターンを確認することをお勧めします。

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