APC ウサギ抗マウスTNF-α モノクローナル抗体（FC（細胞内）用） - P06804

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：TNF-αの機能と局在

• 腫瘍壊死因子（TNF-α）は、活性化マクロファージから主に分泌される炎症誘発性サイトカインで、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリー（TNFSF2）に属します。カケクチンとしても知られ、Tnf遺伝子（別名Tnfa、Tnfsf2）にコードされています。
• TNF-αは、TNFR1（TNFRSF1A）およびTNFR2（TNFRSF1B）の2種類の異なる受容体に結合することで生物学的効果を発揮し、アポトーシス、細胞生存、炎症を含む多様な細胞応答を媒介します。
• 本サイトカインは急性期反応の主要な媒介因子であり、内因性発熱物質として機能し、直接的に、またはインターロイキン-1の分泌刺激を介して発熱を誘導し、慢性疾患状態における悪液質の発症に関与することが知られています。
• 脂肪組織では、TNF-αはインスリン誘発性IRS1チロシンリン酸化とグルース取り込みを阻害することでインスリン抵抗性を誘導し、GKAP42タンパク質の分解を促進することで2型糖尿病の病因に寄与します。 関連参考文献: PMID:25586176
• TNF-αは骨代謝において重要な役割を持ち、破骨細胞形成を促進することで骨吸収を媒介し、関節リウマチなどの疾患における炎症と骨量減少を結びつけます。 関連参考文献: PMID:32741026
• タンパク質分解切断によって生成されるTNF-αの細胞内ドメイン（ICD）は、シグナル伝達分子として働き、樹状細胞におけるIL-12産生を誘導することができ、受容体非依存的な機能が注目されています。
• 亜細胞レベルでは、TNF-αは細胞膜上でII型膜貫通タンパク質（26 kDa）として合成され、TNF-α変換酵素（TACE）によって切断されて可溶性の17 kDaサイトカインが放出されます。本タンパク質は、グリコシル化、リン酸化、ミリストイル化、ジスルフィド結合形成を含む複数の翻訳後修飾を受けます。
• 細胞毒性および炎症作用に加え、TNF-αはIL-1βおよびIL-6と相乗的に血管新生を刺激し、特定の条件下では細胞増殖や分化を促進することもあり、多面的な性質を示します。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はマウスTNF-α（NP_038721.1）のアミノ酸80～235番に対応し、成熟可溶性TNF-α領域をカバーしています。この設計は細胞外ドメインを標的としており、膜結合型と可溶性型の両方を認識できる可能性があります。
• 細胞内フローサイトメトリーでは、固定・透過処理プロトコルが非常に重要です。サイトカインに適した固定/透過処理キットを用いた標準的な細胞内染色プロトコルの使用を推奨します。
• TNF-αは分泌タンパク質であるため、静止状態の細胞では細胞内濃度が低い場合があります。安定した検出のため、タンパク質輸送阻害剤（ブレフェルジンAやモネンシンなど）の存在下で細胞を刺激（例：PMA/イオノマイシンまたはLPSによる）し、ゴルジ装置内にTNF-αを蓄積させてください。
• 使用開始濃度として細胞100万個あたり0.5～5 µgの範囲で開始し、実験系ごとに最適な抗体濃度を決定するための滴定を推奨します。
• 特異的染色とバックグラウンドを区別するため、非刺激細胞およびアイソタイプコントロール抗体を含む適切なコントロールを実施してください。
• 本抗体は明るい蛍光団であるAPCで共役されており、多色フローサイトメトリーパネルに適しています。他の蛍光団と併用する場合は、適切に補正を行ってください。

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