DiMethyl-Histone H3-K4 ウサギポリクローナル抗体 (Q16695/P68431) for WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景: ヒストンH3.1t/ヒストンH3.1の機能と局在

ヒストンH3は、クロマチンの基本反復単位であるヌクレオソームのコア構成要素です。ヒストンH2A、H2B、H4とともにオクタマーを形成し、その周りに147塩基対のDNAが巻き付くことで、ゲノムをコンパクトにし、DNAへのアクセス性を調節します。この構造は、転写、複製、修復、染色体安定性を含むDNA鋳型プロセスに不可欠です。

標準的なヒストンH3.1バリアントは複数の遺伝子（例：HIST1H3AからHIST1H3J）によってコードされ、S期に新しく複製されたDNA上に組み込まれます。一方、H3.1tアイソフォーム（遺伝子H3-4 / HIST3H3）は精巣特異的バリアントであり、主に精巣細胞で発現し、精子形成過程におけるクロマチンリモデリングに関与している可能性があります。

ヒストンH3は、その柔軟なN末端尾部で広範な翻訳後修飾（PTM）を受け、複雑な調節「ヒストンコード」を形成します。既知のPTMには、メチル化、アセチル化、リン酸化、ADP-リボシル化、ユビキチン化などがあります。リジン4（H3K4）のメチル化は重要なマークです：ジメチル化（H3K4me2）は、プロモーターやエンハンサーなどの活性化された、または準備状態の遺伝子調節要素に関連しています。

この抗体は、ヒトヒストンH3のN末端尾部（アミノ酸1-100）に対応する合成ペプチドに対して作製されました。この領域はK4残基を含み、種間で高度に保存されています。本抗体はK4のジメチル化型を特異的に認識します。

ヒストンH3は核に局在し、染色体の構造構成要素です。

関連参考文献: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はヒストンH3のN末端尾部を含み、K4残基を含む領域の認識を保証します。メチル化特異的検出のためには、適切なペプチドブロッキングアッセイや変異ヒストンコントロールで検証してください。
• ウェスタンブロッティング（WB）では、ヒストン濃縮抽出物または全細胞溶解物を使用できます。予想されるバンドは約15 kDaです。高品質の転写膜の使用や、長時間のブロッキングによるバックグラウンドの低減を検討してください。
• クロマチン免疫沈降（ChIP）およびChIP-seqでは、この抗体はH3K4me2の分布マッピングに適している可能性があります。特異性を評価するために、陽性対照部位（例：活性プロモーター）と陰性対照部位（例：遺伝子間領域）を含めてください。ChIP-seqを行う際は、ライブラリー調製とシーケンシング深度を特定の実験計画に合わせて最適化する必要があります。
• 免疫組織化学（IHC-P）および免疫蛍光（IF/ICC）では、抗原賦活化（例：熱処理によるクエン酸バッファーpH 6.0）と透過化処理が検出感度を向上させる可能性があります。エピトープの利用可能性に影響を与える可能性があるため、異なる固定方法（例：ホルマリン対メタノール）をテストしてください。
• 本抗体は、H3 N末端の配列保存性が高いため、ヒト、マウス、ラット、その他種との交差反応性が予測されます。新しい種を使用する場合は、エピトープの保存性を確認するための配列アラインメントと、陽性対照実験の実施を検討してください。
• メチル化特異的抗体は、他のメチルリシンマークと交差反応性を示すことがあります。特異性を確認するためには、ジメチル-K4および他の修飾ペプチドを用いた競合的ペプチドブロッキング実験を含めてください。
• 最適な希釈倍率は、各アッセイごとに経験的に決定する必要があります。

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