ジメチル化ヒストンH3-K79 ウサギポリクローナル抗体 (Q16695/P68431) – WB、IHC-P、ChIP-seqに適合

主要製品仕様・パラメータ

生物学的背景：ヒストンH3の機能と局在

• ヒストンH3はヌクレオソームのコア構成要素であり、DNAを巻き付けてクロマチンへと凝縮する上で必須です。この構造的な組織化によりDNAのアクセシビリティが制御され、転写、DNA修復、複製、染色体安定性に中心的な役割を果たしています。 関連参考文献: UniProt Q16695, UniProt P68431

• ヒストンH3には複数のバリアントが存在します。H3C1～H3C12などの遺伝子にコードされる標準型ヒストンH3.1は遍在的に発現するのに対し、精巣特異的バリアントH3.1t（H3-4）は主に精巣細胞で発現します。両者は配列類似性が高く、保存されたK79残基も共通しています。 関連参考文献: UniProt Q16695 (組織特異性), UniProt P68431

• メチル化、アセチル化、リン酸化などのヒストンH3の翻訳後修飾（PTM）は、クロマチン動態を制御する「ヒストンコード」を構成しています。リジン79（K79）はメチル化（モノ、ジ、トリメチル化）が生じる著名な部位であり、ジメチル化（H3K79me2）は転写制御、DNA修復、テロメアサイレンシングに関与することが知られています。 関連参考文献: 関連する修飾については PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588 をご参照ください

• 本抗体はジメチル化K79を持つ合成ペプチドを免疫して作製されました。K79におけるヒストンH3のジメチル化状態を特異的に検出するよう設計されており、配列が保存されていることから多くの種で広く反応性が予測されています。 関連参考文献: UniProt Q16695, UniProt P68431

• 細胞内局在：ヒストンH3は主に核および染色体上に存在し、ヌクレオソームコアの一部を構成しています。 関連参考文献: UniProt Q16695, UniProt P68431

実験ガイダンス・技術的ヒント

• 免疫原設計：本抗体はヒトヒストンH3（NP_003520.1）のジメチル化K79を含む合成ペプチドを用いて作製されました。同様の修飾特異的抗体については、高い特異性を確保するために、修飾状態が明確な合成ペプチドの使用を推奨します。
• ウエスタンブロッティング（WB）：ヒストンH3の予測分子量は約15 kDaです。最良の結果を得るため、酸抽出したヒストンまたは全細胞溶解物を使用し、低分子タンパク質に合わせてゲル濃度および転写条件を最適化してください。ご使用のサンプル系で必ずバリデーションを実施してください。
• 免疫組織化学（IHC-P）および免疫蛍光（IF/ICC）：クエン酸緩衝液などによる抗原賦活化が必要になる場合があります。様々な抗体希釈倍率でテストを行ってください。組織の固定および包埋処理によりエピトープのアクセシビリティが変化する可能性がある点にご留意ください。
• クロマチン免疫沈降（ChIP/ChIP-seq）：本抗体はChIPおよびChIP-seq用途に適合すると記載しています。ホルムアルデヒドなどによる適切な架橋処理と、約200～500 bp断片へのクロマチンの断片化を確実に行ってください。メチル化状態に応じた適切なポジティブコントロールおよびネガティブコントロールを含めてください。
• ELISAおよびIP：標準プロトコルが使用可能です。IPの場合、プレクリーニングと適切な溶解バッファー（ヒストン抽出の場合はRIPAなど）の使用により、シグナル対ノイズ比が向上する可能性があります。
• 交差反応性：本抗体はヒト、マウス、ラットのヒストンH3を認識し、配列相同性に基づきその他多くの種での交差反応性が予測されています。対象の種における交差反応性は必ず実験的に確認してください。
• 全般的な注意点：ポリクローナル抗体全般に言えることですが、ロット間差を考慮し、ロットを切り替える際には再バリデーションを実施してください。推奨される方法で保存し（保冷剤で出荷されます）、複数回の凍結融解を避けてください。

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