WB、IHC-P、IF/ICC、IP、ELISA用EGFRウサギpAb - P00533

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：EGFRの機能と局在

• EGFRは、EGFファミリーリガンド（EGF、TGFA、AREG、BTC、エピレグリン、HBEGFなど）に結合し、細胞の増殖、生存、分化を制御する受容体型チロシンキナーゼです。 関連文献： PMID:10805725、PMID:27153536、PMID:2790960
• リガンドの結合により受容体の二量体化と自己リン酸化が誘導され、RAS-RAF-MEK-ERK、PI3K/AKT、PLCγ/PKC、STAT、NF-κB経路などの下流シグナルカスケードが活性化されます。 関連文献： PMID:27153536、PMID:11116146
• EGFRは、RGS16（Gタンパク質シグナル伝達を調節）やMUC1（SRC/β-カテニン相互作用を促進）など、非受容体基質もリン酸化します。 関連文献： PMID:11602604、PMID:11483589
• この受容体は主に細胞膜に局在しますが、エンドソーム、ゴルジ体、小胞体、核へ輸送されることもあり、空間的に制御されたシグナル伝達を可能にします。
• 複数の翻訳後修飾（リン酸化、ユビキチン化、水酸化、メチル化、パルミトイル化）が、EGFRの活性、安定性、細胞内分布を微調整します。
• 正常組織で広く発現しています。選択的スプライシングによるアイソフォーム2は卵巣がんで特に検出され、EGFアンタゴニストとして機能する可能性があります。
• 内因性リガンドに加えて、EGFRはC型肝炎ウイルス（HCV）の侵入における宿主受容体として機能し、ウイルスの細胞内取り込みを促進します。
• EGFRはがん原遺伝子として認識されており、EGFRの制御異常（過剰発現または活性化変異）は多数のがんを引き起こすため、主要な治療標的となっています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原（aa 1021～1210）は細胞質ドメイン内に位置し、一般的な変性条件下でも保存されています。ウエスタンブロッティングでは、標準的なRIPA溶解および還元条件下のSDS-PAGEを使用し、適切な陽性細胞株（例：A431、HeLa）および陰性細胞株を設定することを検討してください。
• IHC-Pでは、EGFRがしばしば高度にN-グリコシル化された膜貫通糖タンパク質であるため、抗原賦活化処理（例：pH 6.0のクエン酸緩衝液またはpH 9.0のTris-EDTA）の条件最適化が必要になる場合があります。
• ヒト、マウス、ラットとの交差反応性が報告されていますが、特に遺伝子改変モデルを使用する場合は、実験系における種特異的な反応性とシグナルの特異性を確認することを推奨します。
• 分子量が大きい（約134 kDa）ため、ウエスタンブロッティングでは8%またはグラジエントSDS-PAGEゲルを使用し、転写条件（例：一晩のウェット転写、またはメタノール濃度を下げたセミドライ転写）を最適化してください。
• 免疫沈降（IP）実験では、ライセートのプレクリアリングとウサギIgGアイソタイプコントロールの使用により、非特異的結合を低減できます。
• ELISAを構築する際は、このポリクローナル抗体とモノクローナル捕捉抗体を組み合わせることで、アッセイ感度が向上する可能性があります。最適な濃度を決定するため、チェッカーボード滴定を実施してください。

CamelBio：ワンストップ調達パートナー

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