ESRα ウサギモノクローナル抗体（WB用） - P03372

製品の主要仕様・パラメータ

生物学的背景：エストロゲン受容体の機能と局在

• エストロゲン受容体α（ERα）はER-alpha、エストラジオール受容体、核内受容体サブファミリー3グループAメンバー1（NR3A1）とも呼ばれ、ESR1遺伝子にコードされ、核内ホルモン受容体スーパーファミリーに属します。
• 選択的スプライシングにより複数のアイソフォームが生成され、機能ドメインを欠くものも存在します。これらのアイソフォームは、リガンドやDNAへの結合の競合、ヘテロ二量体化を通じて、全長型受容体の転写活性を調節することができます。 関連文献: PMID:10970861
• 17β-エストラジオールが結合すると、ERαはコンフォメーション変化を起こし、ホモ二量体化が促進されて標的遺伝子プロモーターのエストロゲン応答配列（ERE）に直接結合するか、他の転写因子（例：AP-1、Sp1、NF-κB）と結合してERE非依存的な転写を調節します。
• ERαはまた、膜から開始される速やかなエストロゲンシグナル伝達を媒介し、様々なキナーゼカスケードを活性化します。MTA1を介したBRCA1とBCAS3の転写調節に必須です。 関連文献: PMID:17922032
• NOS3の活性化と内皮性一酸化窒素産生に関与し、血管恒常性の維持に寄与します。 関連文献: PMID:21937726
• 主に核に局在しますが、細胞質、細胞膜、ゴルジ装置にも存在します。その細胞内分布は、リガンド結合と翻訳後修飾によって動的に制御されています。
• 翻訳後修飾にはリン酸化、パルミトイル化、メチル化、ユビキチン化、グリコシル化があり、これらが受容体の安定性、局在、転写活性に影響を与えます。
• 多くの組織で広く発現していますが、特に下垂体には発現が認められません。 関連文献: PMID:10970861

実験ガイダンス・技術的なヒント

• 免疫原はヒトESRαのC末端領域の495～595残基に対応しています。この領域は複数のアイソフォームに存在する可能性がありますが、異なるスプライスバリアントを発現する細胞株を用いてアイソフォーム特異性を確認することを推奨します。
• ウエスタンブロット（WB）の場合、予測分子量は66 kDaです。分子量確認のためにプレステインドマーカーを使用し、非特異的結合を低減するためにブロッキング条件を最適化してください。
• 免疫沈降（IP）を実施する際は、ERαの安定性を維持するため、適切なプロテアーゼ阻害剤とフォスファターゼ阻害剤を添加した新鮮なライセートを調製してください。
• クロマチン免疫沈降（ChIP）の場合、ERαのクロマチン相互作用は一過性でありリガンド刺激に依存するため、架橋と超音波処理のパラメータを慎重に最適化してください。
• フローサイトメトリー（細胞内染色）では、アイソタイプコントロールを含め、核抗原に適した透過処理プロトコルを検証してください。
• ELISAの場合、キャプチャー試薬または検出試薬として抗体を使用する際は、組換えERαタンパク質を用いて滴定を行い、最適な作動濃度を決定してください。
• すべての応用についてヒトサンプルで検証済みです。他の種に対する反応性は実験により確認してください。

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