WB、IHC-P、ELISA、ChIP用KDバリデーション済み抗TFEBウサギモノクローナル抗体 - P19484

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：TFEBの機能と局在

• TFEB（転写因子EB）は、Class E basic helix-loop-helix protein 35（bHLHe35）としても知られ、MITFおよびTFE3を含む、basic helix-loop-helix leucine zipper（bHLH-Zip）転写因子のMiT／TFEサブファミリーに属します。
• TFEBは、リソソーム遺伝子およびオートファジー関連遺伝子のプロモーターに存在する協調的リソソーム発現・制御（CLEAR）モチーフ（5′-GTCACGTGAC-3′）に結合することで、リソソーム形成およびオートファジーのマスターレギュレーターとして機能します。 関連文献： PMID:19556463、PMID:22692423
• TFEBの活性は、栄養状態に応答するリン酸化によって厳密に制御されています。栄養充足条件下では、mTORを介した複数のセリン残基のリン酸化によりTFEBは細胞質に保持されます。一方、飢餓状態またはリソソームストレスではmTORが阻害され、急速な脱リン酸化と核移行が引き起こされます。 関連文献： PMID:21617040、PMID:22343943、PMID:22576015
• 核内では、TFEBは自身または他のMiT／TFEメンバーと二量体を形成し、オートファジー、脂質代謝、エネルギーホメオスタシス、免疫防御に関与する標的遺伝子の転写を活性化します。 関連文献： PMID:1748288、PMID:29146937
• さらにTFEBは、T細胞におけるCD40L発現を調節することで適応免疫に関与し、また、核局在化およびリソソーム形成を促進するイタコン酸を介したアルキル化を通じて、抗菌自然免疫にも関与します。 関連文献： PMID:35662396
• 細胞内局在は動的です。リン酸化されている場合は主に細胞質に存在し、活性化されると核へ移行します。また、リソソーム膜と結合することもあります。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトTFEB（NP_009093.1）のアミノ酸50～173に相当します。この領域はN末端転写活性化ドメイン内に位置し、ヒト、マウス、ラット間で比較的よく保存されているため、報告されている交差反応性を支持します。記載されていない種については、配列アラインメントを推奨します。
• ウェスタンブロットでは、TFEBはリン酸化状態の違いまたは選択的スプライシングにより、44～53 kDaの間でダブレットとして検出される場合があります。溶解バッファーに新鮮なホスファターゼ阻害剤を添加すると、リン酸化アイソフォームの保存に役立ちます。本抗体はノックダウン特異性（KDバリデーション済み）について検証されています。
• 免疫組織化学（IHC-P）では、組織の種類に応じて抗原賦活化条件を最適化してください。TFEBの活性化状態に応じて、核および細胞質の染色が観察される場合があります。
• ChIPでは、使用する細胞種に応じて架橋および超音波処理条件を最適化してください。本抗体により、CLEARまたはE-box配列を含むプロモーター領域を効率的に濃縮できるはずです。
• アッセイを確立する際は、適切な陽性および陰性対照（例：TFEBノックアウト溶解液、既知の標的遺伝子座）を実施してください。

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