[KO検証済み] Anti-Caspase-8 Rabbit Monoclonal Antibody for WB, ELISA - Q14790

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：Caspase-8の機能と局在

• Caspase-8（FLICE、MACH、MCH5とも呼ばれる）は、システインアスパラギン酸プロテアーゼファミリーの55 kDaの開始カスパーゼであり、選択的スプライシングを通じて複数のアイソフォームで産生されます。全長のアイソフォーム1は触媒活性を持ちますが、短いアイソフォームは優性陰性インヒビターとして機能する可能性があります。
• 外因性アポトーシスの主要な開始因子として、Caspase-8はFASまたはTNFRSF1A刺激により、アダプターFADDを介して死受容体複合体（DISC）に動員され、二量体化、自己触媒的切断、および下流のエフェクターカスパーゼ（CASP3/7）とBIDの活性化を引き起こし、細胞死を実行します。関連参考文献： PMID:8681376, PMID:8681377, PMID:9184224
• アポトーシスだけでなく、Caspase-8はAsp-324でRIPK1を切断することによりネクロプトーシスを負に制御し、RIPK1キナーゼ活性を阻害し、TNF誘導性ネクロプトーシスおよび炎症シグナル伝達を防ぎます。関連参考文献： PMID:31827280, PMID:31827281
• Caspase-8はまた、ガスダーミン-C（GSDMC）およびガスダーミン-D（GSDMD）を切断・活性化することによりピロトーシスを媒介し、膜破裂と炎症性細胞死を引き起こすN末端の孔形成ドメインを放出します。関連参考文献： PMID:32929201, PMID:34012073
• 主に細胞質に局在しますが、核およびラメリポディアにも見出されます。そのプロテアーゼ活性に依存しないTyr-380でのリン酸化は、細胞移動を促進します。関連参考文献： PMID:18216014, PMID:27109099
• Caspase-8は広く発現しており、末梢血白血球、脾臓、胸腺、および肝臓でmRNAレベルが最も高く、脳、精巣、および骨格筋では非常に低い発現を示します。
• さらに、Caspase-8はアポトーシス中にPARP1およびPARP2を切断し、グランザイムB仲介性細胞傷害性細胞死経路に関与する可能性があります。関連参考文献： PMID:8681376, PMID:8755496

実験的ガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原は、ヒトCaspase-8の触媒ドメイン内の残基200-300に対応します。この領域は全長プロ酵素および大きな触媒サブユニットの両方に存在するため、この抗体は未処理型および切断型の両方を検出する可能性があります。
• ウェスタンブロットについては、還元条件下でSDS-PAGEを行ってください。約55 kDa（全長）の主要なバンドを予想し、細胞処理に応じて、活性化されたp18/p10断片を表すより小さなバンドが現れる可能性があります。必ず分子量マーカーを含めてください。
• この抗体はKO検証済みと報告されています。実験系でのバンド特異性を確認するために、ネガティブコントロールとしてCaspase-8ノックアウト細胞ライセートの使用を検討してください。
• ELISAアプリケーションの場合、最適なコーティング抗原および抗体濃度を確立するためにチェッカーボード滴定を行ってください。利用可能であれば、既知の標準に対して検証してください。
• Caspase-8の活性化を研究する場合、細胞に適切な誘導剤（例：アポトーシスにはTNF-α + シクロヘキシミド、ネクロプトーシスにはTNF-α + zVAD + Smacミメティック）で処理し、切断動態をモニターして細胞死の様式を区別してください。
• 交差反応性はヒトについてのみ報告されています。他の種に適用する場合は、免疫原性ペプチド配列と対象生物のCaspase-8をアライメントし、潜在的な反応性を評価してください。

CamelBio：ワンストップ調達ブリッジ

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