[KO検証済み] WB、ELISA用抗HER2/ErbB2ポリクローナル抗体 - P04626

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：HER2/ErbB2の機能と局在

• HER2/ErbB2は、ERBB2遺伝子（GeneID：2064）にコードされる受容体型チロシンプロテインキナーゼであり、上皮成長因子受容体（EGFR/ErbB）ファミリーに属します。全長タンパク質は1255アミノ酸からなるI型一回膜貫通タンパク質で、予測分子量は137.9 kDa（実測では約138 kDa）です。
• ニューレグリン受容体複合体における共受容体として機能し、リガンド依存性シグナル伝達に必須ですが、高親和性のリガンド結合およびキナーゼ活性化には、他のErbBファミリーメンバー（EGFR、ErbB3、ErbB4など）とのヘテロ二量体化が必要です。
• HER2シグナルは、MEMO1-RHOA-DIAPH1経路を介して末梢微小管の伸長および安定化を制御します。GSK3Bを阻害し、APCおよびCLASP2の膜結合を促進することで、微小管の捕捉と安定化を促進します。
• 核内では、HER2は転写制御因子として機能し、PTGS2/COX-2プロモーター（5’-TCAAATTC-3’配列）に結合して転写を活性化します。また、STAT3およびSRCの関与を介してCDKN1Aの発現を促進するとともに、RNA Pol IによるrRNA遺伝子の転写も促進し、タンパク質合成および細胞増殖を高めます。
• 細胞内局在には、細胞膜、ラッフル膜、初期エンドソーム、細胞質（核周辺領域）、核が含まれ、その多様なシグナル伝達および転写機能を反映しています。
• HER2は、原発性乳がん、小腸がん、食道がん、腎がん、口腔がんなど、さまざまな腫瘍組織で過剰発現しており、重要なバイオマーカーおよび治療標的となっています。
• 主な翻訳後修飾にはリン酸化（リン酸化タンパク質）および糖鎖付加が含まれます。また、シグナルペプチド、ジスルフィド結合、選択的開始および選択的スプライシングによるアイソフォームを有します。
• UniProtのキーワードでは、生物学的役割として、活性化因子、選択的スプライシング、ATP結合、細胞膜、疾患バリアント、キナーゼ、受容体、シグナル、転写制御、転移酵素、膜貫通が示されています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原配列（アミノ酸1156～1255）はHER2のC末端細胞質ドメインに位置するため、本抗体はウェスタンブロット（WB）で全長型（約138 kDa）を認識すると予想されます。このエピトープを保持する場合、短縮型または選択的スプライシングアイソフォームも検出される可能性があります。
• WBでは還元条件を使用してください。糖鎖付加およびリン酸化された成熟タンパク質は、わずかに高分子量側へ移動する場合があります。HER2陽性および陰性の細胞株（例：SK-BR-3とMCF-7）を用いてバンドの特異性を検証し、製品検証で示されているKO検証済みライセートが利用可能な場合は使用してください。
• ELISAでは、細胞内エピトープであることを考慮し、ペプチドコーティングまたは直接抗原捕捉の使用を検討してください。関連する試料マトリックスで、コーティング条件および抗体希釈倍率を最適化してください。
• 腫瘍での発現量が高いため、乳がん細胞株または腫瘍組織のライセートでは強いシグナルが得られる可能性があります。適切なローディングコントロールを含め、総タンパク質量に対して正規化してください。

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