モノメチル化ヒストンH3-K9 ウサギモノクローナル抗体 | Q16695 / P68431 – WB、ChIP、ELISAなどに使用するメチル化特異的抗体

製品の主要仕様とパラメータ

生物学的背景：ヒストンH3の機能と局在

ヒストンH3はクロマチンの基本反復単位であるヌクレオソームの主要構成要素です。DNAの凝縮と、転写、複製、修復機構へのアクセス性の調節に中心的な役割を果たします。

ヒストンH3生物学の重要な特徴は、「ヒストンコード」仮説です。これは、その柔軟なN末端尾部の翻訳後修飾（PTM）の特定の組み合わせが、異なるクロマチン状態と下流の核内プロセスを制御するというものです。これらのPTMの中で、リジン9のメチル化（H3K9me）は最も集中的に研究されているマークの一つであり、しばしば転写抑制、ヘテロクロマチン形成、ゲノム安定性と関連付けられています。

関連文献: PMID:11242053 PMID:16267050 PMID:17194708

成熟H3タンパク質の9番目のリジン（UniProtの位置10に対応）は、モノ、ジ、またはトリメチル化といった異なるメチル化状態で見られ、それぞれが異なる生物学的結果をもたらします。モノメチル化H3K9（H3K9me1）は主に、ユークロマチン領域の活性遺伝子のプロモーターとエンハンサーで濃縮されており、転写活性を微調整しますが、特定の細胞状況下ではセントロメア周辺ヘテロクロマチンでも検出されています。

関連文献: PMID:16185088 PMID:16457588

ヒストンH3は、異なる遺伝子によってコードされる複数のバリアントとして存在します。標準的なH3.1（SWISS P68431）は複製依存的に発現し、S期にクロマチンに組み込まれます。一方、精巣特異的バリアントであるH3.1t/H3‑4（Q16695）は精巣細胞でのみ発現し、精子形成特異的なクロマチン動態に寄与している可能性があります。この抗体のエピトープはH3バリアント間で高度に保存された領域にまたがっており、幅広い検出を可能にしています。

関連文献: なし（配列記録に基づく組織特異性）

細胞内局在としては、ヒストンH3は核に局在し、染色体DNAと強く結合しています。

この抗体はH3K9のモノメチル化型を特異的に認識します。修飾部位の保存性の高さから、複数の種およびH3サブタイプと反応することが予測されます。

実験ガイドと技術的ヒント

• WB用サンプル調製: シグナル対雑音比を改善するために、酸抽出ヒストンまたは核濃縮リシートの使用を検討してください。全細胞リシートの場合は、適切なプロテアーゼ阻害剤カクテルを含め、ヒストン修飾を剥がす可能性のある変性条件は避けてください。
• 特異性の検証: どのアッセイにおいても、ペプチド競合実験（ドットブロットまたはELISA）で合成モノメチル化K9ペプチドと非メチル化K9ペプチドを使用して抗体の特異性を確認してください。定義されたメチル化状態を持つ組換えヒストンH3タンパク質アレイも厳密な対照として使用できます。
• ChIPの最適化: クロマチン免疫沈降法では、架橋時間、抗体量、および超音波処理条件は経験的に決定する必要があります。この抗体のモノメチルマークに対する高い親和性により、パンH3抗体と比較して反応あたりの抗体量が少なくて済む場合があります。常にモノメチル特異的ペプチドブロッキング対照を含めてください。
• IHCおよびIFの考慮事項: 固定と抗原賦活化はエピトープへのアクセス性に影響を与える可能性があります。IHC-Pでは、熱媒抗原賦活化ステップ（クエン酸緩衝液、pH 6.0）を含む標準的なホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）プロトコルがうまく機能することが多いですが、予備試験をお勧めします。免疫蛍光法では、短時間のメタノール透過処理が核染色を強化する可能性があります。
• ELISA/ドットブロットアプリケーション: モノメチル化H3(1‑21)ペプチドまたは全長組換えH3K9me1でプレートをコーティングし、結合親和性と直線性を評価してください。代替としてBSA結合ペプチドを使用することもできます。
• 種交差反応性: 広範な反応性が予測されていますが、大規模な実験の前に、特定のサンプルシステム（例：マウス、ラット、その他の関連種）で抗体を検証することをお勧めします。

CamelBio：ワンストップ調達の架け橋

CamelBioは、診断メーカー、研究機関、研究所をコンセプトから臨床までつなぐ、包括的なIVD原材料パートナーです。ヒストン修飾に基づくエピジェネティックアッセイの開発や、メチル化特異的免疫測定法の構築において、CamelBioは検証済み抗体ペア、最適化されたモノクローナル/ポリクローナル抗体、バルクの補助試薬を供給し、希少ターゲット原材料の調達支援も行うことができます。当社の製品ポートフォリオには、この高親和性モノメチル化ヒストンH3-K9ウサギモノクローナル抗体が含まれており、信頼性が高くロット間差の少ない品質であなたのエピジェネティック研究と診断ニーズをサポートします。