モノメチル化ヒストンH4-K5 ウサギポリクローナル抗体 (P62805)（IF/ICCおよびELISA用）

製品の基本仕様およびパラメータ

生物学的背景：ヒストンH4の機能と局在

• 機能： ヒストンH4はヌクレオソームの主要な構成要素であり、DNAを巻き付けてクロマチンへと凝縮させます。これによりDNAのアクセス性が制限され、転写調節、DNA修復、DNA複製、および染色体の安定性において中心的な役割を果たします。ヌクレオソームは、ヒストンH2A、H2B、H3、H4の各2コピーから構成され、約147塩基対のDNAが巻き付く八量体を形成します。翻訳後修飾を介したヒストンコードは、DNAのアクセス性とヌクレオソームのリモデリングを制御します。 関連リファレンス： UniProtKB P62805

• 細胞内局在： ヒストンH4は主に核内に局在し、染色体と結合しています。アセチル化はその核内分布に影響を与える可能性があり、例えば、アセチル化されたH4はステップ11の精子細胞において核内に局在します。 関連リファレンス： UniProtKB P62805

• 翻訳後修飾： ヒストンH4は、特にN末端テイルにおいて広範な翻訳後修飾を受けます。アセチル化は複数のリジンで発生します（例：K6, K9, K13, K17, K32, K92; PMID:19608861参照）。メチル化はアルギニン4（PRMT1による非対称ジメチル化; PMID:11387442）およびリジン21（モノメチル化; PMID:12086618）で見られます。リジン5のモノメチル化（K5me1）は、様々なリーダータンパク質によって認識される特定のエピジェネティックなマークであり、転写調節に関与しています。その他の修飾にはリン酸化、シトルリン化、ユビキチン化などがあり、これらが組み合わさって複雑な調節コードを形成しています。 関連リファレンス： PMID:19608861, PMID:11387442, PMID:12086618

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原設計： 本抗体は、K5がモノメチル化されたヒトヒストンH4のN末端領域に対応する合成ペプチドに対して作製されました。同様の抗体を設計する際は、ペプチドの純度を高く保ち、修飾が質量分析によって確認されていることを確認してください。特異性を検証するために、アッセイにおいて非メチル化ペプチドをネガティブコントロールとして使用することを検討してください。
• IF/ICC： 免疫蛍光染色には、通常4%パラホルムアルデヒドによる固定と0.1-0.5% Triton X-100による透過処理が適しています。5% BSAまたは血清で非特異的結合をブロックしてください。エピトープのアクセス性は異なる場合があるため、抗原賦活化の最適化を検討してください。ヒストンタンパク質は核内に存在するため、核染色が予想されます。バックグラウンドを評価するために、一次抗体なしのコントロールを含めてください。
• ELISA： コーティングには、抗体または抗原を炭酸/重炭酸バッファー（pH 9.6）で希釈してください。最適なS/N比を決定するために、抗体濃度を滴定してください。特異性を確認するために、モノメチル化ペプチドをポジティブコントロールとして、未修飾ペプチドをネガティブコントロールとして使用してください。
• 全般： 修飾特異的抗体と同様に、ロット間でばらつきが生じる可能性があるため、特定の実験系で新しいロットを検証してください。配列の保存性に基づき、ヒト、マウス、ラットでの交差反応性が予測されますが、対象となる種でテストを行ってください。

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