WB、IF/ICC、ELISA用 PAK1 ウサギモノクローナル抗体 - Q13153

製品の中核仕様とパラメータ

生物学的背景: PAK1の機能と局在

• PAK1遺伝子によってコードされるPAK1 (p21活性化キナーゼ1) は、セリン/スレオニンタンパク質キナーゼであり、alpha-PAK、p65-PAK、PAKalphaとも呼ばれる。これは、小GTPaseであるCDC42とRAC1のエフェクターとして機能するPAKキナーゼファミリーに属する。
• PAK1は、インテグリンおよび受容体型チロシンキナーゼの下流における重要なシグナル伝達ノードとして機能し、細胞骨格ダイナミクス、細胞接着、遊走、増殖、アポトーシス、有糸分裂、小胞媒介輸送を含む多様な細胞プロセスを調節する (PubMed:10551809, PubMed:11896197, PubMed:12876277)。 関連参考文献: PMID:10551809 PMID:11896197 PMID:12876277
• GTP結合型CDC42およびRAC1によって活性化されると、PAK1はRhoファミリーGTPaseをJNK MAPキナーゼ経路に連結し、MAP2K1、RAF1、LIMK1などの下流標的をリン酸化し、それにより遺伝子発現とアクチン再構築に影響を与える (PubMed:8805275, PubMed:9528787, PubMed:11733498, PubMed:23633677)。 関連参考文献: PMID:8805275 PMID:9528787 PMID:11733498 PMID:23633677
• PAK1は、細胞質、焦点接着、ラメリポディア、膜ラフル、インバドポディア、核質、中心体など、複数の細胞内区画に局在し、細胞運動、接着、核内シグナル伝達におけるその多面的な役割と一致している。
• このキナーゼは、アクチン細胞骨格と焦点接着複合体の再編成に役割を果たし、ミオシン軽鎖やコフィリンなどの調節因子を直接リン酸化して、アクトミオシン収縮性と細胞形状を調節する (PubMed:9032240, PubMed:9395435)。 関連参考文献: PMID:9032240 PMID:9395435
• 神経細胞では、PAK1は、樹状突起スパイン形成、興奮性シナプス発達、およびGABA作動性抑制性伝達に必須であり、部分的にはF-アクチンの安定化およびミオシンII調節軽鎖のリン酸化を介している。
• PAK1はがんに関与している：胃がん細胞および組織で過剰発現し (PubMed:25766321)、細胞遊走と浸潤を促進し、クロマチンリモデリング (MORC2, PubMed:23260667) および上皮間葉転換 (SNAI1, PubMed:15833848) に関与する基質をリン酸化する。 関連参考文献: PMID:25766321 PMID:23260667 PMID:15833848
• さらに、PAK1はインスリン分泌 (PubMed:22669945)、DNA損傷応答、およびストレス顆粒ダイナミクスにも関与する (PubMed:20417602)。 関連参考文献: PMID:22669945 PMID:20417602

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトPAK1のアミノ酸1-100にまたがる合成ペプチドであり、これはN末端領域に相当する。この領域は、報告されている交差反応性と一致して、ヒト、マウス、ラット間で保存されている可能性が高い。
• ウェスタンブロット (WB) では、PAK1の予測分子量は約61 kDaである。ただし、翻訳後修飾やスプライスバリアントにより、追加のバンドが生じる可能性がある。適切な還元条件下で、既知の陽性対照 (例：HeLaまたはMCF-7細胞ライセート) を用いて検証すること。
• 免疫蛍光 (IF/ICC) では、PAK1は動的な細胞内分布を示し、細胞タイプや刺激に応じて、焦点接着、膜ラフル、核内に出現する。パラホルムアルデヒドによる固定と、Triton X-100またはメタノールによる透過処理が適している可能性があるが、特定の細胞株と条件に合わせた最適化を推奨する。
• ELISAでは、この抗体は直接法または間接法で使用できる。アッセイの感度と特異性を確立するために、免疫原ペプチドを陽性対照として使用することを検討すること。
• この抗体は他のアプリケーションでは試験されていない。IP、ChIP、または機能阻害に使用する場合は、関連するサンプルシステムでの徹底的な検証を推奨する。

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