Phospho-Chk1-S317 ウサギポリクローナル抗体 (WB, ELISA) - O14757

中核製品仕様およびパラメータ

生物学的背景: Chk1の機能と局在

• セリン/スレオニンプロテインキナーゼChk1 (CHEK1)は、DNA損傷または複製ストレス時に細胞周期停止とDNA修復を仲介することでゲノム完全性を保証する重要な細胞周期チェックポイントキナーゼです。 関連参考文献: PMID:11535615, PMID:12399544, PMID:12446774
• Chk1はCDC25A、CDC25B、CDC25Cをリン酸化し、14-3-3結合またはプロテアソーム分解を介したそれらの阻害を引き起こし、それによりCDK-サイクリンの活性化を防ぎ、細胞周期進行をブロックします。 関連参考文献: PMID:12676583, PMID:12676925, PMID:12759351, PMID:9278511, PMID:19734889, PMID:20090422
• Chk1は、相同組換え修復を促進するためにRAD51のThr-309を直接リン酸化し、その活性化と細胞周期停止を増強するためにTP53の複数のC末端部位をリン酸化し、DNA架橋修復を促進するためにFANCEをリン酸化します。 関連参考文献: PMID:15665856, PMID:10673501, PMID:15659650, PMID:16511572, PMID:17296736
• Chk1はTLK1のSer-743をリン酸化し、ASF1Aのリン酸化を防ぎクロマチン組み立てを増強し、また複製フォーク維持のためにPCNAを調節します。 関連参考文献: PMID:12660173, PMID:12955071, PMID:18451105
• さらに、Chk1はヒストンH3.1 (H3T11ph)をリン酸化して遺伝子をエピジェネティックにサイレンシングし、E2F相互作用を促進するためにRB1をリン酸化し、複製ストレスとG2/Mチェックポイントを調節するためにSPRTNおよびPABIR1/FAM122Aを標的とします。 関連参考文献: PMID:17380128, PMID:31316063, PMID:33108758
• 内因性スプライスバリアントは、全長Chk1の抑制因子として機能し、その機能に拮抗してS期からG2/M期への移行を促進します。
• 細胞内局在として、Chk1は核、染色体、細胞質、および中心体に局在し、有糸分裂期には中心体で濃縮されます。
• 広く発現しており、胸腺、精巣、小腸、大腸で最も高い発現レベルを示します。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はSer317周辺の合成リン酸化ペプチドです。この部位の内因性リン酸化を保持するために、サンプル調製にはホスファターゼ阻害剤を含めることを確認してください。
• ウェスタンブロット法では、約54 kDaの特異的バンドが期待されます。特異性は、細胞溶解物をラムダホスファターゼで処理するか、非リン酸化特異的Chk1抗体を対照として使用することで検証してください。
• ELISAでは、固定化ペプチドまたは細胞溶解物を使用し、リン酸化特異性を確認するためにリン酸化対非リン酸化ペプチドによるブロッキングを検討してください。
• 特定の実験系に合わせて抗体希釈率を最適化してください。WBの典型的な開始希釈率は1:500–1:2000ですが、経験的決定が推奨されます。
• 交差反応性はヒトサンプルで確認されています。他の種については、Ser317周辺の配列相同性を確認し、実験的にテストしてください。

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