Phospho-Cyclin D1 (T286) ウサギポリクローナル抗体（WB、IHC-P、ELISA用） - P24385

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景: Cyclin D1の機能と局在

• Cyclin D1 (CCND1)はG1/S期特異的サイクリンであり、B細胞リンパ腫1タンパク質(BCL-1)およびPRAD1癌遺伝子としても知られる。
• Cyclin D1-CDK4複合体の調節サブユニットとして機能し、レチノブラストーマ(RB)ファミリータンパク質をリン酸化してE2F転写因子を遊離し、G1/S期移行を促進する。 関連参考文献: PMID:1827756, PMID:1833066, PMID:19412162
• さらに、Cyclin D1はSMAD3の基質として作用し、SMAD3の転写活性を抑制する。CDK4およびCDKN1Bとの三量体複合体を形成して核移行を担う。また、INSM1と共に細胞周期非依存的な形でプロモーター上でコリプレッサー活性を発揮する。 関連参考文献: PMID:15241418, PMID:9106657, PMID:16569215, PMID:18417529
• 細胞内局在: Cyclin D1は核、細胞質、核膜に存在する。
• 翻訳後修飾: Cyclin D1はリン酸化タンパク質であり、イソペプチド結合およびユビキチン様結合の特徴が報告されている。
• Cyclin D1は主要な細胞周期制御因子および原癌遺伝子であり、染色体再構成を介して癌に関与している。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 本抗体は、ヒトCyclin D1のThr-286周辺の配列に対応する合成リン酸化ペプチドに対して作製されている。刺激された細胞や細胞周期中の細胞における内在性リン酸化Cyclin D1の検出への適合性を考慮すること。
• ウェスタンブロッティングでは、約34 kDa付近に主要なバンドが期待される。リン酸化シグナルを保持するため、細胞溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を含めることを推奨する。
• 免疫組織化学(IHC-P)では、最適な抗原賦活化およびブロッキング条件を最適化する必要がある。リン酸化特異性は、ホスファターゼ処理またはリン酸化ブロッキングペプチド競合により確認できる。
• ELISA適用では、抗体および抗原濃度の滴定が必要な場合がある。非リン酸化ペプチド対照を用いてアッセイの特異性を検証すること。
• 交差反応性はヒト、マウス、ラットのサンプルに対して示されているが、免疫原と標的種の配列アラインメントを確認して保存性を確認することを推奨する。

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