Phospho-Histone H3-T3 Rabbit pAb for WB, ELISA - Q16695 / P68431

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：ヒストンH3の機能と局在

• ヒストンH3.1t（H3/gまたはH3.4とも呼ばれます）は、典型的なヒストンH3の精巣特異的バリアントです。これはH3-4 (HIST3H3) 遺伝子によってコードされ、HIST1H3Aなどの追加の遺伝子を含む大きなヒストンH3ファミリーに属しています。
• コアヒストンとして、H3はH2A、H2B、H4と共にヒストンオクタマーを形成し、これがクロマチンの基本反復単位であるヌクレオソームを構築します。ヌクレオソームはDNAをコンパクトな構造にパッケージ化し、遺伝情報へのアクセスを制限します。
• この凝縮は、転写、DNA複製、DNA修復、および全体的な染色体の安定性の調整において中心的な役割を果たします。ヌクレオソームの制御されたアンラッピングまたはリモデリングにより、細胞内の装置がDNA鋳型を読み取り、コピー、または修復できるようになります。
• ヒストンの機能は、N末端テールにおける複雑なアレイの翻訳後修飾（「ヒストンコード」）によって動的に調節されています。これらには、リン酸化（Thr-3など）、アセチル化、メチル化、およびその他多くの修飾が含まれ、それらが協調してクロマチン状態を調節し、下流のエフェクタータンパク質を募集します。
• H3.1tは主に核に局在し、クロマチンに組み込まれます。DNAパッケージングにおけるその役割と一致して、細胞周期を通じて染色体と強く結合しています。
• H3.1tの発現は主に精巣細胞に限定されており、精子形成中のクロマチン再編成における特化した機能を示唆しています。他のH3バリアントはより広範に発現し、体細胞で同様のヌクレオソームの役割を果たしています。
• H3.1tのUniProtキーワードには、「リンタンパク質」、「アセチル化」、「メチル化」、「シトルリン化」、「ADPリボシル化」が含まれており、その機能を支配する広範な修飾ランドスケープを強調しています。

実験のガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原は、ヒトHIST1H3AのThr-3にまたがる合成リン酸ペプチドです。この設計は、ヒストンH3のリン酸化型を特異的に認識する抗体を生成することを目的としています。研究者は、ホスファターゼ処理サンプルと未処理サンプルのシグナルを比較することで特異性を確認する必要があります。
• この抗体は、ウェスタンブロット（WB）およびELISAで検証されています。WBの場合、全細胞ライセートまたはヒストン富化抽出物を使用でき、約15 kDaのバンドが期待されます。H3の修飾状態によって移動度が変化する可能性があります。リン酸化シグナルを維持するために、溶解およびサンプル調製中は必ずホスファターゼ阻害剤を含めてください。
• ELISAでは、プレートをリン酸化ペプチドまたはリン酸化ヒストンタンパク質でコーティングすることを検討してください。結合特異性を評価するために、適切なコントロール（非リン酸ペプチドなど）を含めてください。
• 脊椎動物におけるH3 N末端テールの保存性が高いため、予測される交差反応性は広範囲です（ヒト、マウス、ラットなど）。ただし、定量的アプリケーションの前に、関連する種および組織での検証が推奨されます。
• 免疫組織化学または免疫細胞化学アプリケーションの場合、この抗体は元々これらのフォーマット向けに開発されたものではないことに注意してください。適切な抗原回復および検出条件でのパイロットテストを行うことをお勧めします。

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