Phospho-MAP2K4-T261 ウサギ pAb - P45985

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景: MAP2K4の機能と局在

• MAP2K4 (MEK4、MKK4、SEK1、JNKK1などの別名でも知られる) は、二重特異性プロテインキナーゼであり、ミトジェン活性化プロテイン (MAP) キナーゼシグナル伝達カスケードの主要構成要素として機能します。
• これはストレス活性化プロテインキナーゼ/c-Jun N末端キナーゼ (SAP/JNK) 経路における必須のキナーゼであり、JNKs (MAPK8/JNK1、MAPK9/JNK2、MAPK10/JNK3) およびp38 MAPKs (MAPK11、MAPK12、MAPK13、MAPK14) を直接リン酸化して活性化します。
• MAP2K4はJNKsのThr-Pro-Tyrモチーフ内のチロシン残基を優先的にリン酸化し、一方MAP2K7はスレオニン残基を標的とします。これらは協調して様々な刺激に応答してJNKsを活性化します。
• このキナーゼは末梢リンパ組織の恒常性維持に必要であり、シトクロムc放出を介したアポトーシスを含むミトコンドリア死シグナル伝達に関与しています。
• 細胞内局在は細胞質と核の両方を含み、細胞表面から核へのシグナル伝達におけるその役割と一致しています。
• MAP2K4は組織全体で広く発現しており、特に骨格筋で豊富な発現が観察されています。
• このタンパク質は、その活性を調節するアセチル化、メチル化、リン酸化を含むいくつかの翻訳後修飾を受け、また選択的スプライシングの対象となります。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• Thr261周辺の合成リン酸化ペプチドに対して作製されたリン酸化特異的抗体であるため、サンプル調製中の内因性MAP2K4のリン酸化状態を保持するために、細胞溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を含めることが極めて重要です。
• ラムダホスファターゼで細胞溶解物を処理することにより抗体特異性を検証してください。抗体が厳密にリン酸化T261型を認識する場合、脱リン酸化が成功するとシグナルは消失するはずです。
• ウェスタンブロッティングでは、予想される分子量は約44 kDaです。このサイズ範囲に適したゲル濃度と転写条件を使用してください。
• 免疫原領域の配列相同性に基づき、ヒト、マウス、ラットとの交差反応性が予測されますが、関連する種での検証をお勧めします。
• ELISAアプリケーションでは、この抗体を捕捉または検出試薬として使用することを検討し、リン酸化ペプチドまたはタンパク質標準品を用いて経験的にコーティング条件と検出条件を最適化してください。

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