Phospho-POLR2A CTD-T4 ウサギポリクローナル抗体（WB、IP、ELISA、ChIP用） - P24928

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景：POLR2Aの機能と局在

• POLR2AはRNAポリメラーゼII (Pol II) の最大サブユニットをコードし、約217 kDaのタンパク質としてDNA依存性RNA合成の触媒中心を担い、mRNAおよび非コードRNA産生に必須です。 関連文献: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• POLR2AのC末端ドメイン (CTD) は52回のタンデムヘプタペプチドリピート (YSPTSPS) からなり、主にSer2およびSer5で動的なリン酸化を受け、転写開始、伸長、終結および共転写的RNAプロセシングを調節します。 関連文献: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2Aは、ヌクレオチド付加に必須のMg2+イオンを配位するDxDGDモチーフを含み、校正のための3'-5'エキソヌクレアーゼ活性も有し、高い転写忠実性を保証します。 関連文献: PMID:8381534, PMID:9852112
• 主に核内および染色体上に局在しますが、細胞質でも検出され、その動的なシャトリングと多面的な役割を反映しています。
• セリン/スレオニンリン酸化、リシンアセチル化、メチル化、ユビキチン化などの翻訳後修飾は、Pol IIの活性と安定性を調節します。
• 選択的スプライシングにより複数のアイソフォームが生成され、POLR2Aの変異は神経発達障害と関連しており、その臨床的重要性が示されています。
• また、RNA依存性RNAポリメラーゼとして非コードRNAを伸長する機能や、感染時のB型肝炎デルタウイルスのレプリカーゼとしても機能します。

実験ガイドラインと技術的ヒント

• 免疫原はPOLR2A CTDリピートのT4に対応するリン酸化特異的ペプチドであるため、非リン酸化ペプチドを用いた競合実験やホスファターゼ処理した細胞ライセートを用いて、抗体の特異性とリン酸化依存性を確認してください。
• ウェスタンブロッティング (WB) では、タンパク質サイズが大きい (~217 kDa) ため、低濃度のSDS-PAGEゲル (例: 6-8%) の使用と、フルレングスのPOLR2Aの効率的な転写を確保するための長時間転写を検討してください。
• ChIPアプリケーションでは、架橋とクロマチン断片化条件の最適化が必要な場合があります。200–500 bpのクロマチンフラグメントを得るために、異なる断片化方法 (例: 超音波処理または酵素消化) をテストしてください。
• 免疫沈降 (IP) およびELISA実験では、適切な陽性対照および陰性対照 (例: POLR2A発現が既知の細胞株 (HeLa、HEK293など) のライセート、可能であればリン酸化欠損変異体) を含めてください。

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