Phospho-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 ウサギポリクローナル抗体（WB、IF/ICC、IHC-P、ELISA用） - Q15796 / P84022

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景：SMAD2およびSMAD3の機能と局在

• SMAD2は、TGF-βおよびアクチビン経路の細胞内シグナル伝達因子として機能する受容体調節型SMAD（R-SMAD）です。
• リガンド結合により、I型受容体キナーゼがC末端SSXSモチーフ（Ser465およびSer467）でSMAD2をリン酸化し、その活性化、SMAD4との複合体形成、核移行を引き起こします。
• 核内では、SMAD2/SMAD4複合体が標的遺伝子プロモーターのTGF-β応答エレメント（TRE）に結合し、転写を調節します。
• SMAD2は、大腸癌における腫瘍抑制因子として機能する可能性があります。 関連参考文献： PMID:8752209
• 骨格筋、内皮細胞、心臓、胎盤で高発現しています。
• SMAD3はSMAD2の近縁ホモログであり、同様の活性化機構を共有しています。本抗体は、SMAD3の対応する部位Ser423/425のリン酸化を検出します。
• 主要な翻訳後修飾には、リン酸化、アセチル化、ユビキチン化が含まれます。SMAD2は亜鉛結合部位も含みます。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は、二重リン酸化モチーフを標的とする合成リン酸化ペプチドであり、活性化型SMAD2およびSMAD3に対する特異性を提供します。ホスファターゼ処理サンプルを使用してリン酸化特異性を確認してください。
• ウェスタンブロットでは、リン酸化を保持するためにライシス時にホスファターゼ阻害剤を含め、新鮮なサンプルの使用を検討してください。SMAD2およびSMAD3の予測分子量は約48-52 kDaですが、リン酸化やアイソフォームにより複数のバンドが現れる可能性があります。
• 免疫蛍光および免疫組織化学では、4% PFAによる標準的な固定とTriton X-100による透過化が適している場合があります。IHC-Pでは抗原賦活化を最適化してください。
• ELISAは、TGF-β経路活性化のハイスループットスクリーニングに使用できます。多種間研究では交差反応性のテストが推奨されます。
• リン酸化特異性を確認するために、適切な陽性対照および陰性対照（例：TGF-β処理細胞と未処理細胞）を常に含めてください。

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