Phospho-Smad2-S465/S467 + Smad3-S423/S425 ウサギモノクローナル抗体 (WB, ELISA用) - Q15796/P84022

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：SMAD2の機能と局在

• SMAD2 (Mothers against decapentaplegic homolog 2、別名MADH2またはMADR2) は、TGF-βおよびアクチビンI型受容体キナーゼの細胞内シグナル伝達因子として機能する受容体制御型SMAD (R-SMAD) です。
• リガンド結合後、SMAD2はC末端セリン残基S465/S467でリン酸化され、SMAD4と複合体を形成して核へ移行し、TREエレメントに結合して遺伝子転写を制御します。
• 主要な負の制御因子である14-3-3タンパク質YWHAQからの解離を促進することにより、PDPK1キナーゼ活性を正に調節します。
• SMAD2は結腸直腸癌において腫瘍抑制因子として機能する可能性があります。 関連文献: PMID:8752209
• 細胞内では、SMAD2は細胞質と核の両方に局在し、リン酸化状態によって動的にシャトリングします。
• 組織発現は、骨格筋、内皮細胞、心臓、胎盤で顕著です。
• リン酸化、アセチル化、ユビキチン化を含む翻訳後修飾が、SMAD2の活性と安定性を微調整します。
• 本抗体は、SMAD2のS465/S467およびSMAD3の相同部位であるS423/S425の二重リン酸化を検出します。これらはTGF-βシグナル伝達の活性化に不可欠です。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 本ウサギモノクローナル抗体は、ヒトSMAD2のS465/S467周辺の合成リン酸化ペプチドに対して作製されており、活性化されたリン酸化状態に対する特異性を保証しています。
• ウェスタンブロッティングでは、標的のリン酸化を維持するために、溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を含めてください。予想される主要バンド：約52 kDa (SMAD2) および約48 kDa (SMAD3)。約25、35、43 kDaの追加バンドは、切断産物またはアイソフォームである可能性があります。ホスファターゼ処理済みコントロールまたはsiRNAノックダウンを用いて特異性を確認してください。
• ELISAでは、パン抗体を使用してリン酸化シグナルを総SMAD2/3レベルで正規化することを検討し、実験条件を経験的に最適化してください。
• ヒト、マウス、ラットのタンパク質との交差反応性が確認されています。適切なTGF-β刺激を行い、実験系における内在性のリン酸化レベルを確認してください。

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