ウサギ抗ヒトCD33モノクローナル抗体（フローサイトメトリー用） - P20138

製品コア仕様・パラメータ

生物学的背景：CD33の機能と局在

• 骨髄球表面抗原CD33（Siglec-3、gp67）は、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（Siglec）ファミリーに属するI型膜貫通受容体であり、CD33遺伝子にコードされています。
• CD33は細胞間相互作用を媒介し、α-2,3結合およびα-2,6結合のシアル酸を持つ糖鎖を優先的に認識・結合することで、免疫細胞を静止状態に維持します。 関連参考文献: PMID:10611343, PMID:11320212, PMID:15597323, PMID:7718872
• C1qやシアル化糖タンパク質などのリガンドが結合すると、細胞質尾部に存在する免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ITIM）がLCKなどのSrc様キナーゼによってリン酸化され、タンパク質チロシンホスファターゼであるPTPN6/SHP-1およびPTPN11/SHP-2のドッキングサイトが生成されます。 関連参考文献: PMID:10887109, PMID:28325905, PMID:10206955, PMID:10556798
• 動員されたホスファターゼが下流のシグナル伝達分子を脱リン酸化し、その抑制効果の1つはホスホイノシチド3-キナーゼ/PI3Kに依存します。 関連参考文献: PMID:15597323
• CD33は主に単球系・骨髄系細胞（単球、マクロファージ、顆粒球）の表面、および脳内では小膠細胞に発現しています。
• 細胞内ではCD33は細胞膜とペルオキシソームに局在します。シグナルペプチド、免疫グロブリン様V型ドメイン、膜貫通ヘリックスを持っています。
• このタンパク質は選択的スプライシングを受け、リン酸化、N連結グリコシル化、ジスルフィド結合形成などの翻訳後修飾が行われます。予測分子量は約39.8 kDaですが、グリコシル化の違いやアイソフォームの発現により、25 kDa、33 kDa、39 kDaの複数のバンドが観察されます。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原（アミノ酸18-259番）はヒトCD33の細胞外ドメイン全体を含んでおり、細胞表面に存在する天然型の受容体を認識しやすい特長があります。
• フローサイトメトリーで使用する際は、最適濃度を決定するために抗体の滴定を行ってください。陽性対照として、CD33陽性の細胞株（THP-1、U937など）またはヒト末梢血単球を使用できます。
• 標識により、二次試薬を使用せずに直接検出が可能です。蛍光強度を維持するため、抗体は光から保護し、凍結融解の繰り返しを避けてください。
• ペルオキシソーム局在の確認などで細胞内染色が必要な場合は、色素と適合する固定・透過処理プロトコルの使用をご検討ください。

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