細胞内フローサイトメトリー用 ウサギ抗ヒトTNF-α モノクローナル抗体 - P01375

製品の主な仕様・パラメータ

生物学的背景：腫瘍壊死因子の機能と局在

• 腫瘍壊死因子α（TNF-α）はカケクチンまたはTNFSF2とも呼ばれ、TNFスーパーファミリーの主要なサイトカインであり、膜貫通型と可溶性型の2つの形態で存在します。可溶性型は膜結合型前駆体のタンパク質分解切断によって生成されます。
• TNF-αは受容体であるTNFRSF1A/TNFR1およびTNFRSF1B/TNFBRに結合し、アポトーシス、細胞生存、炎症、免疫調節を引き起こすシグナル伝達経路を活性化します。強力な発熱物質であり、直接的に、またはIL-1の誘導を介して発熱を引き起こし、悪液質の誘導に関与します。
• 関節リウマチでは、TNF-αはタンパク質ホスファターゼ1（PP1）の発現を上昇させることで制御性T細胞の機能を損ないます。PP1はFOXP3のSer-418を脱リン酸化し、これによりFOXP3が不活性化され、Treg細胞の機能が不全になります。 関連文献: PMID:23396208
• TNF-αは抗がん免疫応答において細胞死の媒介因子として作用します。BCGで刺激された好中球や膀胱がん細胞におけるDIABLO/SMAC模倣薬との関わりがその例です。 関連文献: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• IL1BおよびIL6と相乗的にVEGFの産生を誘導することで血管新生を促進します。 関連文献: PMID:12794819
• TNF-αは脂肪細胞において、インスリンによるIRS1のチロシンリン酸化とグルコース取り込みを阻害することでインスリン抵抗性を誘導します。この作用は一部GKAP42タンパク質の分解を介しており、破骨細胞形成を促進して骨吸収に寄与します。
• 亜細胞レベルでは、TNF-αは細胞膜および細胞内膜に局在し、分泌されます。TNFの細胞内ドメイン（ICD）型は、樹状細胞においてIL12の産生をさらに誘導することができます。
• 翻訳後修飾にはジスルフィド結合形成、グリコシル化、ミリストイル化、リン酸化が含まれ、これらはTNF-αの安定性と活性にとって重要です。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 本抗体の免疫原（アミノ酸77-233番）は、N末端の膜貫通ドメインを欠くTNF-αの成熟可溶性型に対応しています。この設計により、分泌型と細胞内前駆体の両方の検出が期待できます。
• コンジュゲートはフローサイトメトリー用に最適化されています。細胞内染色には、サイトカイン用に検証された固定/透過処理プロトコルの使用を推奨します。適切なアイソタイプ対照を含め、刺激サンプルと非刺激サンプルで染色を確認してください。
• 染色能は細胞種や活性化状態によって異なるため、使用する実験系に最適な抗体濃度を決定するために、滴定実験を実施してください。

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