ウサギ抗ヒト/サル CD14 モノクローナル抗体（フローサイトメトリー用） - P08571

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景：CD14の機能と局在

• CD14は、骨髄系細胞特異的なロイシンリッチ糖タンパク質であり、単球分化抗原CD14またはMy23抗原としても知られる。
• CD14は、細菌リポ多糖（LPS）の主要な共受容体として機能し、自然免疫認識と応答を仲介する。 関連参考文献： PMID:1698311, PMID:23264655
• LBPと協調して、CD14は単量体LPSに結合し、それをLY96/TLR4複合体に運搬し、それによりMyD88-、TIRAP-、TRAF6依存経路を介したNF-κB活性化と炎症性サイトカイン分泌を駆動する。 関連参考文献： PMID:20133493, PMID:22265692, PMID:23264655, PMID:8612135
• さらに、CD14はTLR2:TLR6およびTLR2:TLR1ヘテロ二量体の共受容体として作用し、それぞれジアシル化およびトリアシル化リポペプチドを認識し、脂質ラフト依存性シグナル伝達を引き起こす。 関連参考文献： PMID:16880211
• CD14はまた、陰性荷電LDL（LDL(-)）に結合し、LDL(-)によって誘導されるサイトカイン放出を仲介し、動脈硬化関連炎症への関与が示唆されている。 関連参考文献： PMID:23880187
• タンパク質レベルでは、CD14は単球表面で強く、顆粒球で弱く検出される。また、ほとんどの組織マクロファージでも発現している。 関連参考文献： PMID:1698311
• 細胞内局在では、CD14は細胞膜に存在し、膜ラフトに濃縮され、ゴルジ装置にも見られる。分泌型も存在する。
• このタンパク質はGPIアンカー型糖タンパク質であり、複数のロイシンリッチリピートとジスルフィド結合を持ち、これらの特徴はその機能に重要である。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• フローサイトメトリー染色では、ヒト末梢血単核球（PBMC）またはカニクイザル白血球を用いて標識抗体の最適希釈率を決定するために力価滴定を行う。
• CD14はGPIアンカー型膜タンパク質であるため、細胞表面染色プロトコルを使用する。ラフト局在複合体を破壊する可能性があるため、細胞内染色を意図しない限り、透過処理は避ける。
• 単球/マクロファージマーカー（例：CD16、CD163）および生存性色素との共染色を検討し、単球集団を正確にゲーティングする。
• 非ヒト霊長類研究に進む場合は、カニクイザルサンプルでの交差反応性を確認する。本抗体の報告されたカニクイザルとの反応性はトランスレーショナルリサーチを可能にする。
• CD14は可溶型として脱落する可能性があるため、緩く結合した抗体を除去する可能性のある過度の洗浄ステップを避け、染色には0.5% BSA/PBS緩衝液を使用する。
• データ解析では、を使用する際に適切な補償対照を使用し、FSC/SSCでゲーティングして単球/マクロファージ集団を同定する。

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