WB、IF/ICC、ELISA用TLR4ウサギポリクローナル抗体 - O00206

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：TLR4の機能と局在

• Toll様受容体4（TLR4）は、病原体関連分子パターンおよび損傷関連分子パターン（PAMPおよびDAMP）を認識し、自然免疫応答を開始する膜貫通型パターン認識受容体です。 関連文献： PMID:10835634 PMID:15809303 PMID:16622205
• 形質膜上で、TLR4はLY96（MD-2）と協働し、細菌リポ多糖（LPS）に対する自然免疫応答を媒介します。 関連文献： PMID:27022195
• TLR4はMYD88およびTIRAPを介してシグナルを伝達し、NF-kappa-Bの活性化と炎症促進性サイトカインの分泌を引き起こします。一方、CD14を介した内在化は、TICAM1-TBK1-IRF3を介するMYD88非依存性経路を活性化し、I型インターフェロンを産生します。 関連文献： PMID:10835634 PMID:21393102 PMID:27022195 PMID:14517278
• TLR6との複合体において、TLR4は単球／マクロファージにおける炎症を促進し、リガンド誘導性の内在化とシグナル伝達を引き起こして、特定のサイトカイン産生を誘導します。 関連文献： PMID:23880187
• TLR4は、遊離脂肪酸およびNi(2+)によって引き起こされるLPS非依存性の炎症応答にも関与し、NLRP3インフラマソームの活性化を開始します。 関連文献： PMID:20711192 PMID:32894580
• 細胞内局在として、TLR4は細胞膜、初期エンドソーム、ならびにラッフルなどの細胞突起に局在します。
• TLR4は胎盤、脾臓、末梢血白血球で高発現しており、単球、マクロファージ、樹状細胞、T細胞で検出されます。また、膵がん細胞でも発現しています。 関連文献： PMID:9237759 PMID:9435236 PMID:27022195 PMID:36232715
• このタンパク質はロイシンリッチリピート、ジスルフィド結合を含み、糖鎖修飾されています。また、Toll様受容体ファミリーに属し、自然免疫および炎症応答において重要な役割を果たします。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はヒトTLR4のアミノ酸27～228に相当し、細胞外ロイシンリッチリピートドメインをカバーしています。この領域はリガンド認識および受容体二量体化において重要です。
• ウエスタンブロッティング（WB）では、96kDa付近のバンドが予想されます。ただし、糖鎖修飾および二量体化の可能性により、わずかに高い分子量の分子種が現れる場合があります。適切な陽性対照（例：THP-1細胞、脾細胞溶解液）を用いて検証してください。
• 免疫蛍光／免疫細胞化学（IF/ICC）では、TLR4は細胞膜、エンドソーム、ラッフルで検出できます。使用する細胞種に合わせて固定および透過化条件を最適化し、これらの細胞内区画のマーカーとの共染色を検討してください。
• ELISAでは、この抗体をTLR4の捕捉または検出に使用できます。ヒトまたはマウス由来の組換えタンパク質あるいは細胞溶解液を用いて性能を確認してください。
• ポリクローナル抗体であるため、複数のエピトープを認識する可能性があります。これにより検出感度が向上する一方、バックグラウンドが高くなる場合もあります。抗体濃度の滴定およびブロッキング条件の最適化を推奨します。
• ヒトおよびマウスのTLR4との交差反応性が示されています。他の種を使用する場合は、各実験系で反応性を確認してください。

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