WB、ChIP、CUT&Tagアプリケーション用トリメチル-ヒストンH3-K27ラビットモノクローナル抗体 (Q16695/P68431)

主要な製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：ヒストンH3の機能と局在

ヒストンH3はコアヒストンタンパク質であり、H2A、H2B、H4と共にヌクレオソーム（クロマチンの基本となる反復単位）を形成します。ヌクレオソームはDNAを巻き付けて凝縮させ、それによって転写、複製、修復を担う細胞内機構への遺伝情報のアクセシビリティを制御します。この中心的な役割により、ヒストンはゲノムの安定性と遺伝子発現の重要な調節因子となっています。

ヒストンの機能的多様性は、主に「ヒストンコード」と総称される多様な翻訳後修飾（PTM）によって媒介されます。アセチル化、メチル化、リン酸化などのこれらの修飾は特定の残基で起こり、クロマチン動態を支配します。その中でも、リシン27におけるヒストンH3のトリメチル化（H3K27me3）は、条件性ヘテロクロマチンの形成と長期的な遺伝子サイレンシングに関連する抑制マークとして確立されています。

このラビットモノクローナル抗体は、ヒトヒストンH3（NP_003520.1に基づく）のK27を含む合成トリメチル化ペプチドを用いて作製されました。K27がトリメチル化されている場合にのみヒストンH3を特異的に認識し、様々なアッセイにおいてこのエピジェネティックマークを正確に検出することを可能にします。

関連参考文献： PMID:16267050, PMID:17194708

実験のガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原はK27周辺の合成トリメチル化ペプチドであるため、この抗体はトリメチル化状態に対して高い特異性を示すと期待されます。未修飾、モノ、ジ、トリメチル化ペプチドを用いたドットブロットまたはペプチド競合アッセイにより、特異性を検証することを検討してください。
• ウェスタンブロット（WB）では、ヒストン豊富な核抽出物または酸抽出ヒストンを使用することをお勧めします。予測されるバンドは約15 kDaです。タンパク質のローディングを正規化するために、適切なローディングコントロール（全H3またはヒストンH3 C末端抗体など）を使用してください。
• クロマチン免疫沈降（ChIP）では、この抗体を使用してH3K27me3でマークされたクロマチン領域を濃縮できます。各細胞タイプについて、クロマチンの切断（せん断）条件と抗体濃度を最適化してください。qPCR解析には、ポジティブコントロール領域（例：HOX遺伝子座）およびネガティブコントロール領域（例：ハウスキーピング遺伝子プロモーター）を含めてください。
• CUT&Tag（Cleavage Under Targets & Tagmentation）の場合、この抗体はターゲティングおよびin situ切断のための一次抗体として機能します。ビーズベースまたは直接結合アプローチについては、メーカーのプロトコルに従ってください。ゲノムワイド解析により、ゲノム全体におけるH3K27me3の分布が明らかになる可能性があります。
• 免疫蛍光（IF/ICC）および免疫組織化学（IHC-P）では、核染色が期待されます。固定（例：IFでは4% PFA、IHCではホルマリン固定パラフィン包埋切片）および透過処理の条件を最適化してください。血清/BSAによるブロッキングは、背景を低減するのに役立ちます。
• 常に、関連するサンプルシステムおよびアプリケーションのコンテキストで抗体を検証してください。再現性のある結果を確保するために、抗体の滴定を行い、適切なコントロールを含めてください。

CamelBio：ワンストップ調達パートナー

CamelBioは、IVD（体外診断）原材料の包括的なワンストップ調達パートナーとして、試薬の発見から臨床応用までのギャップを埋めます。エピジェネティクスおよびクロマチン生物学の研究のために、このTriMethyl-Histone H3-K27 Rabbit mAbのような検証済みのモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体に加え、最適化された抗体ペア、バルクの補助試薬、カスタマイズされたレアターゲットの調達を提供しています。バッチ間の一貫した再現性が必要な場合、または診断アッセイのスケールアップに関するサポートが必要な場合でも、CamelBioはコンセプトからクリニックまで、開発プロセス全体をサポートすることに尽力しています。