TriMethyl-Histone H3-K4 (H3K4me3) ウサギポリクローナル抗体 – Q16695/P68431 for ChIP-seq & WB

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：ヒストンH3の機能と局在

ヒストンH3は、H2A、H2B、H4と共にヌクレオソームを形成するコアヒストンタンパク質であり、ヌクレオソームはクロマチンの基本反復単位です。ヌクレオソームはDNAを凝縮し、細胞内機械へのアクセスを調節することで、転写、複製、修復、および染色体の安定性において中心的な役割を果たします。ヒストンの翻訳後修飾は、総称して「ヒストンコード」として知られ、クロマチン構造と遺伝子発現を動的に制御します。 関連参考文献： UniProt Q16695/P68431

ヒストンH3のリシン4のトリメチル化（H3K4me3）は、活性な遺伝子プロモーターの特徴であり、転写開始と伸長と密接に関連しています。この修飾は特定のメチル基転移酵素によって付与され、脱メチル化酵素によって除去され、発生、分化、および疾患における重要なエピジェネティック調節因子として機能します。

ヒストンH3は核内に存在し、染色体と結合しています。複数のバリアントが存在し、典型的なH3.1（複数の遺伝子によってコードされ、P68431で表される）や精巣特異的なH3.1t（Q16695）などが含まれます。H3.1は普遍的に発現していますが、H3.1tは主に精巣細胞に見られます。 関連参考文献： UniProt Q16695

ヒストンのN末端テールは、アセチル化、メチル化、リン酸化など、膨大な種類の修飾を受けており、複雑な調節環境を形成します。包括的なマッピング研究によりこれらの修飾がカタログ化されており、ヒストンコードの複雑な組み合わせの性質が強調されています。 関連参考文献： PMID:17194708

実験のガイダンスと技術的なヒント

• ウェスタンブロット（WB）およびドットブロット（DB）では、約15 kDaの単一バンドが期待されます。ヒストン豊富なライセート（例：酸抽出HeLa核タンパク質）をポジティブコントロールとして使用することを推奨し、ローディングは全H3に対して正規化する必要があります。
• クロマチン免疫沈降（ChIP）およびChIP-seqでは、特定の細胞タイプに合わせて架橋と超音波処理の条件を最適化してください。濃縮を検証するために、既知のH3K4me3陽性座位（例：GAPDHプロモーター）とネガティブコントロール領域を含めてください。
• パラフィン包埋切片（IHC-P）の免疫組織化学では、抗原賦活（例：クエン酸バッファー、pH 6.0）が不可欠です。主に核内染色パターンが観察され、シグナル強度は組織の転写活性を反映します。
• ELISAおよびその他のプレートベースアッセイでは、ポジティブコントロールとしてトリメチル化H3K4ペプチドを使用し、修飾特異性を確認するために未修飾またはモノメチル化ペプチドを使用することを検討してください。
• ポリクローナル抗体と同様に、ロット間の一貫性は、既知の陽性サンプルで滴定を行うことで検証する必要があります。他の種との交差反応性は脊椎動物間の高い配列保存性に基づいて予測されますが、関連するサンプルシステムでの検証が推奨されます。

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