TriMethyl-Histone H4-K20 ウサギポリクローナル抗体 (WB/IHC/IF用) (P62805)

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：ヒストンH4の機能と局在

ヒストンH4は、クロマチンの基本的な繰り返し単位であるヌクレオソームを構成するコアヒストンの一つです。ヒストンH2A、H2B、H3とともに八量体を形成し、約147塩基対のDNAが巻き付くことで、ゲノムを核内に凝縮させ、DNAのアクセス性を調節します。ヒストンH4は、転写調節、DNA修復、DNA複製、および染色体の安定性において中心的な役割を果たします。クロマチン構造の動的な調節は、主にヒストン尾部における一連の複雑な翻訳後修飾（PTM）を介して達成され、これらは総称して「ヒストンコード」と呼ばれます。 関連文献: UniProt P62805

ヒストンH4は主に核内に局在し、染色体と結合しています。アセチル化されたH4は、精子形成の特定の段階（ステップ11精子細胞）においても核内で認められます。 関連文献: UniProt P62805

ヒストンH4の20番目のリジン残基（H4K20）は、モノ、ジ、トリメチル化を含む複数のメチル化状態を受けます。H4K20のトリメチル化（H4K20me3）は、構成的ヘテロクロマチンの特徴であり、遺伝子サイレンシング、DNA損傷応答、および細胞周期調節に関与しています。この修飾は、メチルトランスフェラーゼ（例：SUV4-20H1/2）や脱メチル化酵素によって動的に制御されています。H4上の他の多数のPTMも質量分析法などの技術によって同定されており、ヒストン調節の複雑さが浮き彫りになっています。 関連文献: PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトヒストンH4のトリメチル化K20領域に対応する合成ペプチドです。本抗体はH4K20me3を特異的に認識することが期待されますが、適切なペプチド競合アッセイやノックアウト/ノックダウンモデルを用いて、他のH4メチル化状態や未修飾H4との交差反応性を実験的に排除する必要があります。
• ウェスタンブロット（WB）検出には、ヒストンを濃縮した核抽出物または酸抽出ヒストンをサンプルとして使用することを推奨します。一次抗体濃度を最適化し（例：1:500～1:2000から開始）、適切な二次抗体コンジュゲートを使用してください。
• 免疫組織化学（IHC-P）では、クエン酸緩衝液（pH 6.0）またはEDTA緩衝液（pH 8.0）を用いた抗原賦活化によりエピトープの露出が改善される場合があります。賦活化方法は経験的に最適化してください。
• 免疫蛍光染色（IF/ICC）では、0.1～0.5% Triton X-100またはジギトニンによる透過処理を推奨します。固定条件（例：4% PFA）がエピトープのアクセス性に影響を与える可能性があるため、異なるプロトコルを試験してください。
• ELISAやドットブロット（DB）アッセイで使用する場合は、BSAでブロッキングしたプレートとビオチン標識検出システムの使用を検討し、感度を高めてください。
• 常にネガティブコントロール（例：未修飾H4ペプチドまたはIgGコントロール）を含め、質量分析やその他の直交法を用いて、関連するサンプルシステムにおける抗体の特異性を検証してください。
• 本抗体は広範囲の交差反応性（ヒト、マウス、ラットなど）が予測されますが、関心のある各生物種での検証を推奨します。

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